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多价淋巴毒素β受体激动剂及其治疗用途的制作方法.docx


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专利名称:多价淋巴***β受体激动剂及其治疗用途的制作方法
技术领域:
本发明属于免疫学和癌症诊断与治疗领域。更特别地,它涉及多价淋巴***β受体(LT-β-R)激动剂抗体构建体的制备以及在治疗方法中与化疗剂相组合的用途。
背景淋巴***β受体(LT-β-R)是肿瘤坏死因子家族的成员,它在免疫系统的发展以及免疫系统内很多细胞(包括滤泡树突细胞和很多基质细胞类型)的功能性维持中都具有公认的作用(Matsumoto等,)。LT-β-R的已知配体包括LTα1/β2和被称作LIGHT的第二配体(Mauri等,1998Immunity821)。已经发现可溶配体或激动性抗受体单克隆抗体对LT-β-R的活化会诱导某些癌的死亡(Browning,(1996)-878和美国专利6,312,691)。
本发明提供了多价LT-β-R激动剂及其治疗用途。
发明概述在一个方面,本发明提供了作为人淋巴***β受体(LT-β-R)激动剂的多价抗体构建体。在一个实施方案中,多价抗体构建体包含LT-β-R表位特异性的至少一个抗原识别位点。在某些实施方案中,至少一个抗原识别位点位于scFv结构域,而在其它实施方案中,所有抗原识别位点都位于
scFv结构域。
本发明提供了包含淋巴***β受体(LT-β-R)表位特异性的至少一个抗原识别位点的多价抗体。在一个实施方案中,至少一个抗原识别位点位于scFv结构域内。在另一个实施方案中,所有抗原识别位点都位于scFv结构域内。在又一个实施方案中,该抗体构建体是单特异性的,包括例如CBE11结合的表位。在又一个实施方案中,本发明的多价抗体是四价的。仍在另一个实施方案中,该抗体构建体是BHA10表位特异性的。仍在另一个实施方案中,该抗体构建体是双特异性的。在一个实施方案中,该抗体构建体具有两个CBE11特异性抗原识别位点和两个BHA10特异性识别位点。
抗体构建体可以是二价的、三价的、四价的或五价的。在某些实施方案中,该抗体构建体是单特异性的。在一个实施方案中,该抗体构建体是CBE11结合的表位特异性的,并且在一些实施方案中,它是四价的。在另一个实施方案中,该抗体构建体是BHA10结合的表位特异性的,并且在一些实施方案中,它是四价的。在某些实施方案中,至少一个抗原识别位点位于scFv结构域内。在某些实施方案中,所有抗原识别位点都位于scFv结构域内。其它抗体构建体可以是人LT-β受体上不同表位多特异性的。在某些实施方案中,该抗体构建体是双特异性的。在其它实施方案中,该抗体构建体对BKA11、CDH10、BCG6、AGH1、BDA8、CBE11和BHA10组成的淋巴***
β受体(LT-β-R)表位组中的至少两个成员是特异性的。在一个实施方案中,该抗体构建体是CBE11和BHA10结合的表位特异性的,并且在某些实施方案中,它是四价的。在一个实施方案中,该抗体构建体具有两个CBE11特异性抗原识别位点和两个BHA10特异性识别位点。在任何多特异性抗体构建体中,至少一个抗原识别位点可以位于scFv结构域,并且在某些实施方案中,所有抗原识别位点都位于scFv结构域。
本发明进一步提供了包含SEQIDNOs1-10的抗体构建体,以及编码它们的核酸和载体,包含该核酸和载体的宿主细胞。
在另一个方面,本发明提供了包含该主题抗体构建体和药物可接受载体的药物组合物。在某些实施方案中,该药物组合物可以进一步包含有效量的化疗剂,其中所述组合物给受试者的施用导致肿瘤的超累加抑制。在另一个方面,本发明提供了含有或能够装载有效量的主题多价抗体构建体和药物可接受载体的药物递送装置。在某些实施方案中,该药物递送装置进一步含有或能够装载有效量的化疗剂,其中用所述装置施用该构建体和该试剂会导致肿瘤的超累加抑制。
在另一个方面,本发明提供了治疗受试者癌症的方法,包括给该受试者施用有效量的主题抗体构建体。在某些实施方案中,该受试者是人。本发明还提供了抑制受试者的肿瘤体积的方法,包括给该受试者施用有效量的主题抗体构建体的步骤。在某些实施方案中,抑制肿瘤体积的方法包括给该受试者施用有效量的主题抗体构建体和化疗剂,其中所述构建体和所述试剂的施用会导致肿瘤的超累加抑制。
本发明进一步提供了包括主题药物组合物或药物递送装置,和任选它们的使用说明书的试剂盒。这种试剂盒的用途包括例如治疗应用。在某些实施方案中,任何试剂盒中含有的主题组合物已经被冻干并且使用前需要再水化。
在一个实施方案中,包含本发明多价抗体的药物组合物进一步包含有效量的化疗剂,其中所述组合物的施用导致肿瘤的超累加抑制。本发明还描述了包含有效量的本发明多价抗体构建体和药物可接受载体的药物组合物。在一个实施方案中,该药物组合物进一步包含有效量的化疗剂,其中所述组合物的施用导致肿瘤的超累加抑制。
本发明包括含有或能够装载有效量的本发明多价抗体构建体以及药物可接受载体的药物递送装置。在一个实施方案中,该药物递送装置进一步含有或能够装载有效量的化疗剂,其中用所述装置施用所述构建体和所述试剂会导致肿瘤的超累加抑制。
本发明还包括治疗受试者癌症的试剂盒,其中含有包含本发明多价抗体的组合物。在一个实施方案中,该试剂盒还包括说明书。在另一个实施方案中,该试剂盒包含化疗剂。
本发明还描述了抑制受试者的肿瘤体积的方法,包括给所述受试者施用有效量的本发明多价抗体构建体的步骤。
由下列详细说明书和权利要求,本发明的其它特征和优点将很明显。
附图简述
图1A和1B分别显示了huCBE11/huBHA10双特异性-1抗体构建体的成熟重链的多核苷酸(SEQIDNO1)和推导的多肽序列(SEQIDNO2)。
图2显示了huCBE11/huBHA10双特异性-1抗体构建体的成熟轻链的多核苷酸(SEQIDNO3)和推导的多肽序列(SEQIDNO4)。
图3A和3B分别显示了成熟huCBE11/huBHA10双特异性-2抗体构建体的多核苷酸(SEQIDNO5)和推导的多肽序列(SEQIDNO6)。
图4A和4B分别显示了huCBE11单特异性-1抗体构建体的成熟重链的多核苷酸(SEQIDNO7)和推导的多肽序列(SEQIDNO8)。
图5A和5B分别显示了成熟huCBE11单特异性-2抗体构建体的多核苷酸(SEQIDNO9)和推导的多肽序列(SEQIDNO10)。
图6A和6B显示了双特异性抗体构建体的三级结构示意图,可变区用适当阴影区表示。图6A显示了双特异性-1和双特异性-2抗体的结构,其包含CBE11和BHA10抗原识别位点。图6B显示了包含CBE11抗原识别位点的单特异性-1和单特异性
-2四价抗体的结构。
图7描绘了可以使用本发明方法制备的其它抗体构建体的三级结构示意图。
图8描绘了图,该图显示了HT29细胞的增殖作用对八种激动剂抗LT-β-R抗体的抗体浓度的函数,所述抗体包括huCBE11/huBHA10双特异性-1和双特异性-2抗体构建体(分别为实心圆形和实心正方形)、单特异性-1和单特异性-2抗体构建体(分别为实心三角形和实心菱形)、人源化抗体huCBE11(开放三角形)、人源化抗体huBHA10(开放正方形)、联合施用的人源化抗体huCBE11和huBHA10(开放菱形)和五聚化chuCBE11抗体(开放圆形)。
图9描绘了图,该图显示了WiDr人结肠腺癌肿瘤对双特异性-1的反应,通过测定在双特异性-1(三角形、开放正方形、开放和闭合的圆形)、载体(PBS对照、十字形)和紫杉酚(闭合正方形)以所示剂量植入后不同天数观察的肿瘤重量进行评估。箭头示出了每种剂量的第一次和最后一次给药。
图10用来自多个肿瘤抑制实验的数据描述了huCBE11和双特异性-1活性的回顾性比较。数据是基于肿瘤生长的抑制百分比而计算的,该百分比是在每一实验的第34或35天,使用下式(100-(100x(测试组平均数/安慰剂对照组平均数)))计算的。图上的每一数据点代表来自研究的一个实验测试组。
图11A和11B显示了包含五聚形式CBE11抗体的序列。图11A描述了成熟五聚嵌合CBE11重链的多核苷酸(SEQIDNO17)和推导的多肽序列(SEQIDNO18)。图11B描述了成熟嵌合CBE11轻链的多核苷酸(SEQIDNO19)和推导的多肽序列(SEQIDNO20)。
,在进一步描述本发明之前,在这里定义说明书、实施例和所附权利要求书中使用的某些术语。
单数形式包括所指项目的复数形式,上下文清楚地指出者除外。
术语“施用”包括将本发明化合物,包括但不限于药物组合物或治疗剂递送给受试者的系统或者受试者内或受试者上的特定部位的任何方法。这里使用的短语“全身施用”、“外周施用”意思是化合物、药物或其它物质不是直接施用到中枢神经系统,这样使得它进入患者的系统,从而经受新陈代谢及其它类似过程,例如皮下施用。“肠胃外施用”是指除了肠内和局部施用的施用方式,通常通过注射,包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网腹下、脊柱内和胸骨内注射和输注。
这里使用的术语“抗体”意思是指完全的、完整的抗体,和Fab、Fab’、F(ab)2、Fv及其其它片段。完全的、完整的抗体包括例如单克隆抗体,如鼠单克隆抗体、嵌合抗体、抗个体基因型抗
体、抗抗个体基因型抗体、和人源化抗体,以及其多价形式。术语“免疫球蛋白”或“抗体”(这里可互换使用)是指具有由两条重链和两条轻链组成的四条多肽链基础结构的抗原结合蛋白,所述链例如通过链间二硫键稳定,该抗原结合蛋白具有特异性结合抗原的能力。重链和轻链都折叠成结构域。术语“结构域”是指包含例如通过β-折叠片和/或链内二硫键稳定的肽环(如包含3至4个肽环)的重链或轻链多肽的球形区。基于在“恒定区”结构域的情况下各种类型成员结构域内相对缺少序列变异,或在“可变区”结构域的情况下各种类型成员结构域内的显著变异,结构域这里进一步称作“恒定区”或“可变区”。轻链上的“恒定区”结构域可互换地称作“轻链恒定区”、“轻链恒定结构域”,“CL”区或“CL”结构域。重链上的“可变区”结构域可互换地称作“重链恒定区”、“重链恒定结构域”,“CH”区或“CH”结构域。轻链上的“可变区”结构域可互换地称作“轻链可变区”、“轻链可变结构域”,“VL”区或“VL”结构域。重链上的“可变区”结构域可互换地称作“重链恒定区”、“重链恒定结构域”,“CH”区或“CH”结构域。
术语“区”是指抗体链的一部分,包括如这里定义的恒定或可变区,以及所述结构域的更离散部分。例如,轻链可变结构域或区包括散布于“构架区”或“FRs”之间的“互补决定区
”或“CDRs”,如这里定义。
免疫球蛋白或抗体可以以单体或多聚形式存在。术语“抗原结合片段”是指免疫球蛋白或抗体的多肽片段结合抗原或与完整抗体(即与它们所来源的完整抗体)竞争抗原结合(即特异性结合)。术语“构象”是指蛋白或多肽(如抗体、抗体链、或其结构域或区)的三级结构。例如,短语“轻(或重)链构象”是指轻(或重)链可变区的三级结构,短语“抗体构象”或“抗体片段构象”是指抗体或其片段的三级结构。
结合片段通过重组DNA技术,或通过酶促或化学切割完整免疫球蛋白而产生。结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fabc、Fv、单链,和单链抗体。不同于“双特异性”或“双功能”免疫球蛋白或抗体,免疫球蛋白或抗体被理解为它们的每个结合位点是相同的。“双特异性”或“双功能抗体”是具有两条不同重/轻链对和两个不同结合位点的人工杂合抗体。可以用各种方法制备双特异性抗体,包括杂交瘤的融合或Fab′片段的连接。参见如Songsivilai&Lachmann,-321(1990);,1547-1553(1992)。
术语“抗体构建体”是指一种重组分子,其中包含来自抗体的重链和轻链可变结构域的两个或更多抗原结合片段,并可以包含来自五类Ig(例如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)中任何一种抗体的恒定区的全部或部分。例如,抗体构建体可以由重链
C末端包含单链可变片段的抗体制成。在另一个实例中,抗体构建体可以由抗体两条重链的恒定区的全部或部分组成,该重链的羧基和氨基末端包含单链可变片段。图6用示意图描述了这些构建体中每一个的实例。在又一个实例中,抗体构建体可以包含具有两个或更多可变区的两条重链和具有一个或多个可变区的两条轻链,其中两条重链通过二硫键或其它共价键连接。在另一个实例中,抗体构建体可以包含含有两个或更多可变区的两条重链,其中两条重链通过二硫键或其它共价键连接。图7用示意图描述了这些构建体中每一个的实例。本发明的详细说明书和实施例中描述了本发明抗体构建体的其它实例。
这里使用的术语“抗原”意思是与特异性抗体有反应性的分子。
术语“抗原结合位点”或“抗原识别位点”是指特异性结合抗原上表位的抗体区域。
术语“癌症”或“瘤”通常是指任何恶性瘤或者自发的细胞生长或增生。本文中该术语包括充分发育的恶性瘤,以及恶变前损害。具有“癌症”的受试者例如可以具有肿瘤或白细胞增生如白血病。在某些实施方案中,具有癌症的受试者是具有肿瘤如实体瘤的受试者。癌症包括实体瘤,包括但不限于非小细胞肺癌(NSCLC)、睾丸癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、子宫颈癌、胰腺癌、结肠直肠癌(CRC)、乳腺癌,以及前列腺、胃、皮肤、胃、食管和膀胱癌。

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