第三章高效液相色谱及其应用3h课件.ppt

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1

色谱柱
柱形和柱材
柱填料(固定相)
流动相
流动相的基本组成
溶剂的极性和强度
溶剂的选择性
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2
色谱柱---柱形和柱材
色谱柱一般用直形优质不锈钢管装填特定的固定相填料而制成(固定相填料一般是:粒径很细的、表面多孔并键合了某种功能团的球形硅胶或球形高分子聚合物;也可直接用全多孔的球形或无定形硅胶)。
~5mm,长度为150mm、200mm、250mm三种规格较常用;填料粒度5~10µm。
半制备柱或制备柱内径大于5mm,其填料粒径一般≥10μm,长度一般为150~250mm。
窄径柱内径一般为2mm左右,长度为50~150mm,填料粒径为3µm左右。
微柱HPLC分为三类:微径HPLC(~),毛细管HPLC(柱内径100~500µm),纳级HPLC(柱内径10~100µm);微柱的填料粒径一般为1~2µm,柱长常为5~15cm。
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3
色谱柱---柱填料(固定相)
正相色谱固定相
液固吸附色谱固定相
化学键合正相色谱固定相
反相色谱固定相(均为化学键合相)
其他固定相
凝胶色谱、离子交换、手性拆分、亲和色谱等固定相(这几种也大多为化学键合相)
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a表孔硅胶b无定形全多孔硅胶c球形全多孔硅胶d堆积硅珠
c球形全多孔硅胶最常用,且柱效较高


吸附色谱固定相
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化学键合相(Chemicallybondedphase)
何谓化学键合相?用化学反应的方法将固定液的官能团键合在载体表面上,所形成的填料。
载体主要有两种:
(1)硅胶(最常用),承受pH范围:一般为2~8
(2)有机高分子聚合物,承受pH范围较宽:pH2~12,甚至1~14,但柱效和刚性比硅胶稍差.
目前HPLC除硅胶等吸附色谱柱外,绝大多数固定相为化学键合相.
化学键合相的最大优点是:固定相不易溶解到流动相中
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正相色谱键合相
常用的有下列三种(硅胶表面键合中等极性基团):
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正相色谱固定相应用特性
吸附色谱固定相主要用于分离弱极性脂溶性成分.
流动相一般为正构烷烃(己烷、戊烷、庚烷等)/异丙醇、二***甲烷(或***仿)/甲醇、乙酸乙酯/乙***等。
正相键合相(氨基、***基、二醇基)既可用上述流动相来分离甘油酯等弱极性有机物,也可以乙***(甲醇)/水为流动相分离糖、糖醇、糖苷等较强极性的有机物.
样品组分极性愈强,出峰愈迟;流动相极性越强,出峰越早.
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反相色谱固定相
表面键合的基团一般为非极性烃基
例如C18或叫ODS是常用的非极性键合相。其键合反应为:
SiOH+ClSi(R2)C18H37SiOSi(R2)C18H37+HCl
还有C8,C4,C2,C30,苯基等,最常用的是C18和C8.
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反相色谱固定相应用特性
适用于分离弱极性、中等极性、.
使用极性流动相(常用甲醇/水、乙***/水、四氢呋喃/水、甲醇或乙***/缓冲液等)
极性越弱的组分,保留值越大.
在流动相--有机溶剂/水中,有机溶剂比例越大,则洗脱强度越大,保留值越小.
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