研究生分子生物学实验讲义.doc

研究生分子生物学实验讲义
分子生物学实验讲义
硕士研究生试用教材(第三版)
南方医科大学生物化学与分子生物学教研室
二OO六年五月
分子生物学
实验讲义
硕士研究生试用教材(第三版)
编写人员
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南方医科大学生物化学与分子生物学教研室
二OO六年五月
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前言
分子生物学是二十世纪末发展最快的生命科学,其理论与技术的进步,不仅加速了自身体系的更新,同时也带动了医学科学的变革。随着科技的日新月异,分子生物学的研究手段也得到相应发展,PCR技术、克隆技术、基因芯片技术等的涌现,使得分子生物学溶入到生命科学的各个领域,并发挥着巨大作用。分子生物学是实践性非常强的一门课程,众多的理论知
识必须在实验中进行验证,才能深刻地理解与应用。
开设分子生物学实验选修课程,是医学院校研究生层次人才培养的必要组成。为适应新形式下研究生教学的需要,我们在完善实验室仪器配置标准化的同时,安排了以基因重组体的构建为主线的一系列实验内容,旨在让研究生掌握分子生物学基本技术操作的同时,并能有严谨的实验思路,具备一定的分子生物学科研思维,避免在课题设计上出现不必要的误差。
此次编写的讲义,必然会有欠缺与不足,我们会在今后的工作中不断修正与补充。希望大家对本门课程提出宝贵意见,以帮助我们更好的开展分子生物学实验的教学工作。
生物化学与分子生物学教研室
二OO六年五月
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目录
第一章基因克隆载体的制备………………………………………………… 1
实验一:质粒DNA的抽提与纯化……………………………… 1 实验二:质粒DNA的鉴定……………………………………… 6
第二章目的基因的获取……………………………………………………… 8
实验三:基因的PCR技术…………………………………………8 实验四:DNA限制性酶切技术……………………………………10 实验五:酶切产物的鉴定…………………………………………
12 实验六:酶切产物的回收………………………………………… 15
第三章基因重组子的构建…………………………………………………… 19
实验七:DNA重组连接……………………………………………19 实验八:T载体应用时的DNA重组连接……………………… 25 实验九:重组DNA的转化……………………………………… 29 实验十:重组子的鉴定…………………………………………… 31
第四章 SDS-PAGE检测蛋白………………………………………………… 34
实验十一:蛋白质聚丙烯酰***凝胶电泳………………………… 34
第五章
附录……………………………………………………………………… 38
第一章
基因克隆载体的制备
实验一:质粒DNA的抽提与纯化
目的:
原理: 采用碱变性法,学****小规模制备质粒DNA的技术, 碱变性抽提质粒DNA的质粒DNA是基于染色体DNA与变性与复性的差异而达到分离目的。,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以