类sorcin蛋白的表达、纯化、抗体制备及免疫组化分析.pdf


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辽宁师范大学
硕士学位论文
类sorcin蛋白的表达、纯化、抗体制备及免疫组化研究
姓名:张蓓蓓
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:李庆伟
20070531
学位论文作者签名:张绣学位论文作者签名:孑从学位论文独创性声明期:上。学位论文版权的使用授权书类蛋白的表达、纯化、抗体制各及免疫组化分析本人承诺:所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外,不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果,其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助。均己在论文中做了明确的声明并表示谢意。本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定,及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘,允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后使用本授权书。指导教师签名期日
的主要活性之一:影响心肌细胞的兴奋一收缩偶联是相关的。正常心肌细胞摘要对类鞍捉忻庖咦榛芯康姆治鼋峁砻鳎喝毡酒呷┫低本实验从日本七鳃鳗谇幌僦械魅〕霰嗦肜鄐白的目的基因,克隆到载体中后,对类蛋白进行原核及真核诱导表达,利用亲和层析进行蛋白纯化,以纯化后的类蛋白作为抗原,制备兔抗七鳃鳗多克隆抗体。用姆椒ú獬鲂Ъ酆螅τ酶枚嗫寺】固澹在七鳃鳗的主要免疫器官中进行类蛋白的免疫组化定位,以便研究免疫器官的结构和类蛋白的分布情况,为进一步研究免疫器官在类蛋白活性中的作用和应用类蛋白研制药用新靶点奠定理论基础。类蛋白的诱导表达结果表明:类蛋白在大肠杆菌菌株和菌株中均为包涵体过表达形式。并且,类蛋白在瓸曛械谋泶锪恳1仍贐曛写蟆A硗猓诮湍钢猩形纯到类蛋白的真核表达形式。用ú舛ㄋ玫挠盏急泶锏鞍着ǘ鹊慕峁砻鳎捍炕蟮睦鄐白的浓度可达到/。用椒ḿ觳馔每蛊呷┒嗫寺】固宓慕峁表明:所制备的抗体效价值比较高,可达到。用産姆椒对类蛋白进行定位分析的结果表明:从口腔腺中提取出的天然蛋白的条带位置和纯化后的重组蛋白的位置并不完全一致。组织形态结构特点与其特殊的进食方式和进化地位密切相关。类蛋白在日本七鳃鳗的肠、心脏、肝脏、生殖腺及口腔唾液腺等免疫器官中均有分布,并且分布的表达量各不相同。其中在心脏中的分布量很丰富,这与蛋白中,与细胞内钙释放通道芄惴盒ㄎ唬谛募〔〉男募∠赴中,这种协同定位的能力被破坏。目前研究人员通过对心肌蛋白进行协同定位和体外结合实验。已经明确能够完全抑制心肌通道的开放,并且这种抑制作用会因呋堑ノ涣姿峄跞酢R蚨瑂ü,恢复肌浆网中钙离子浓度,可能在维持钙离子动态平衡和调节心肌病心肌功能紊乱中起着重要的代偿作用。本实验为研究类蛋白的细胞活性和蛋白功能奠定一定的理论基础。关键词:日本七鳃鳗:类鞍祝挥盏急泶铮抗体制备;免疫组化类蛋白的表达、纯化、抗体制各及免疫组化分析.
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篖籗籈籔类蛋白的表达、纯化、抗体制备及免疫组化分析;
┑奶卣骷蚪日本七鳃鳗翟部诟⑵呷┠、七鳃鳗科⑵呷┦动物,主要分布于太平洋北部,南至日本、朝鲜沿岸,北至阿纳德尔和阿拉斯加Ⅲ。在我国主要分布于黑龙江、松花江、乌苏里江和图门江水系。俏夜存唯一的海淡水洄游七鳃鳗。在海水中营半寄生生活,以吸食宿主血肉为食。长久以来,七鳃鳗在进化上因连接着脊椎与无脊椎动物而具有极高的研究价值。它不仅是研究脊椎动物起源与进化的关键物种,同时也是研究脊椎动物胚胎发育、器官分化的最佳模型。由于七鳃鳗特殊的生态特性和进化地位,它在世界动物学研究史上一直占据着重要地位。.七鳃鳗的形态特征七鳃鳗体呈长圆柱形,尾部侧扁。头的两侧各有眼一个,在眼睛之后有一行龇掷氲娜祝子胙劬ε懦梢恢毙泄个象眼睛的点,故通称八目鳗。鼻孔单个,位于头背面两眼的中间;鼻孔后方有一个白色的能感光的松果眼。头前腹面有一个呈漏斗状的口吸盘,张开时呈圆形,闭合时为纵裂缝状,口吸类蛋白的表达、纯化、抗体制备及免疫组化分析图七鳃鳗形态图
盘的周缘的皱皮上有许多细软的乳状突起。口在漏斗的底部,口的两侧有许多黄色角质齿,口内有肉质呈舌形的活塞,其上亦有角质齿。皮肤柔软光滑,无鳞,皮内有很多腺体,分泌粘液使体表粘滑,侧线不发达。无胸鳍和腹鳍。背鲳觯涑ぴ枷嗟龋竺娴谋橱⒂胛谗⑾嗔⑻跞矶该堋H淼墓趋牢软骨和结缔组织,尚无硬骨。脊索终生保留,仍是身体的主要支持结构“<索背面出现了一系列软骨弧片,代表着雏形脊椎骨的开始。生活时背呈青色带绿,腹部灰白色略带淡黄,尾鳍及后背鳍的边缘黑色。.七鳃鳗的生活史七鳃鳗为典型的洄游性鱼类,部分时期在海中生活。秋季

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  • 时间2015-04-05