雌激素方法规范.doc

地表水中六种雌激素化合物分析规范
注:本方法适用于地表水、饮用水和污水中六种雌激素化合物的测定
目标化合物
天然动物性雌激素雌***(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)和作为药物使用的人工合成的雌激素类药物己烯雌酚(DES)、乙炔基雌二醇(EE2)、戊酸雌二醇(EV)、乙烷雌酚、炔诺***等在极低的环境浓度(ng/L)下就可能对生物体造成危害。引起了世界各国的广泛关注。但由于研究相对滞后,美国国家环保局、世界卫生组织和世界动物基金会均未对该类物质作出明确的规定。雌***(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、己烯雌酚(DES)、乙炔基雌二醇(EE2)、戊酸雌二醇(EV)是比较常见和典型的内分泌干扰物质,本研究以上面六种雌激素为目标化合物。
试剂
甲醇(Methanol),HPLC级(美国Fisher Scientific公司);***:色谱纯(TEDIA);
正己烷(n-Hexane),农残级(美国Fisher Scientific公司);叔丁基甲醚:. Baker, US;
硅胶(60-200目),超纯(ANICS);中性氧化铝(50-200目),(ANICS);无水硫酸钠,优级纯,经450℃焙烧12 h后置于密封广口瓶中保存备用;
雌激素分析用标准物质:衍生化试剂:N,O-双(三***硅烷基)三***乙酰***,简称BSTFA(FLUKA),TMSI;EE(乙炔基雌二醇),ALDRICH;E1(雌***),SIGMA;E2(雌二醇)MERCK;E3(雌三醇),FLUKA;EV(戊酸雌二醇)SIGMA;DES(己烯雌酚)FLUKA。
剪刀、滤纸、镊子及药匙(硅胶柱净化所用):以二***甲烷超声清洗15min两次、正己烷超声清洗15min一次;首先硅胶和氧化铝先使用二***甲烷抽提72小时,然后硅胶在180±2℃、氧化铝在250±2℃分别活化12 h(activate);待冷却至室温时,称重后装入大口锥形瓶(250或500mL),加入其重量3%的蒸馏水去活性(deactivate),添加过程中应用滴管逐滴加入,边加边用力振摇以防止结块,并超声振荡30 min;放置过夜,平衡后加入正己烷浸没其表面备用(一般也需放置过夜);玻璃滤膜,经450℃焙烧4 h,准确称重,放入干燥器中放置备用。
仪器
超声波清洗仪(KQ-250D型数控超声波清洗器)
恒温水浴锅(中国科工卫仪器仪表公司)
旋转旋蒸仪(Buchi, Vac® 500/rotavapor R-200/Heating bath B-490,Germany)
氮吹仪(数控氮吹仪,KL512/5093,康林,北京)
气相色谱质谱连用仪:GC6890-MSD5973(Agilent Technologies,美国),使用G1701 DAMSD ChemStation分析处理数据;
毛细色谱柱:HP-5石英毛细管色谱柱:30 m ´ mm ID ´ mm液膜厚
蠕动泵,玻璃滤膜支架,直径50mm ×(Millpore Co.,北京联星事业公司代理)
SPE固相萃取小柱(HLB,Waters Co.)
固相萃取真空装置(12小柱,Supco Co. 配有12根聚四***乙烯导管)
真空泵(Supco Co.)
100级超净工作室;
高纯氮气
玻璃仪