高效液相色谱仪LC3000培训教程.doc

高效液相色谱仪LC3000培训教程
LC3000现场培训教程
——基础部分
一、培训目的
A、了解LC3000高效液相色谱仪结构和基本操作。
B、掌握CXTH-3000色谱工作站的打开、设备连接、数据采集、数据处理,打印报告。
C、常见故障排除
二、培训设备
CXTH LC3000色谱仪
P3000高压输液泵
UV3000紫外检测器
7725i手动进样阀
T2000柱温箱(可选)
C18色谱柱 250× 5u (可选)
其它色谱基本条件(流动相准备、电脑和实验台等)
三、溶剂准备
1、条件:色谱级纯或者优级纯甲醇或者乙腈(ACN)、二次蒸馏水
2、流动相的过滤和超声
3、样品的前处理和过滤
四、
LC3000色谱仪组成 1、 P3000泵和UV3000检测器
一元(等度)系统两元(梯度)系统
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P3000泵界面和基本操作
高压输液泵
泵头压力传感器+排空
泵壳体结构图
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泵头以及传动结构图
单向阀
单向阀内部结构
基本操作:泵的基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者泵仪
器面板控制。
工作站的控制在下面色谱工作站基本控制内容中讲到,以下是泵面板的基本控
制按钮:
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PUMP/STOP 键:按一下该按键可以运行泵,再按一下停止泵运行。
START/HOLD键:按一下该键运行预先设定的程序链(PROGRAM)。再按一
下保持此时的程序运行。
PURGE键:冲洗键。按一次泵按照(SYSTEM SETING)系统设定中设定冲
洗流量运行冲洗。再按一次泵停止冲洗。作用:冲洗泵头气泡和快速更换流动
相。
DEL键:退出键或者删除键。进入子菜单下通过此键退回上一菜单。
ENTER键:进入键或者确认键。按该键进入子菜单。
方向键:光标的上下左右移动。
2、UV3000检测器
UV3000紫外检测器
流通池
基本操作:检测器基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者检
测器仪器面板控制。
波长的设定:按下λ按键进入波长设定界面,通过数字键设定预设波长 TIME CONSTANT(时间常数):在MAIN MENU主菜单下,按ENTER键进
入第一项DETECTOR PARAMETERS,将光标移动到TIME CONTANT下修
改合适的TC值。
RANGE(量程)设定:按下 RANGE 按键,进入量程设定界面,通过数字键
设定波长。
检测器注意事项:流通池中有气泡的处理办法,流通池脏处理办法(见常见故
障维护)。
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3、7725i进样阀
7725i是6通道阀。阀的背面有数字标号:
2号口为流动相进口(泵连接到阀),3号口为流动相出口(阀连接到色谱柱) 1号口和4号口为定量环接口(默认连接的为20微升,可以更换)
5口和6口为废液口。
进样口为阀前端口(实际上7725i有7口)
以上俗称:2进3出、1、4定量,5、6废液。
基本操作:
进样阀前端有LOAD(装样)和INJECT(进样)两个标示。
当阀的把手在LOAD的状态下时,此时处于装样的状态,当样品注入后将阀扳
到INJECT状态,进样过程完成。
进样注意事项:
A、缓慢进样、快速扳阀。阀不要处于中间位置。
B、如果使用缓冲盐、当天使用后要使用含5%有机相的水溶液清洗进样阀。
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4、色谱柱
色谱柱标示:
如:Kromasil 250× 5u 100A分别代表填料名称柱长内径填料大小填料比表面积
色谱柱基本常识:
A、其他条件相同,柱子越长,保留时间越长。
B、其他条件相同,柱内径越小,柱压越高。
C、其他条件相同,柱填料颗粒越小,柱压越高。
D、不同品牌的色谱柱将有不同的特性,如保留时间、柱效等。
E、同等流速下,不同流动相的柱压将不同。包括流动相组分配比的变化也会导致压力
变化。原因是:流动相组分的比例变化导致流动相粘度的变化,从而导致压力的变化。
基本安装注意事项:
A、避免死体积、漏液或损坏柱子
使用正确的接头
尽可能缩短连接管路长度、降低柱外效应
管路切口必须平整
在接上色谱柱前先将管路中的气泡赶净
B、色谱柱安装的方向性
接头不可拧太紧
打开输液泵、检查柱是否漏
按照色谱柱上箭头指示的方向为流动相经过的方向
五、LC3000系统基本操作
1、打开计算机。
2、打开LC3000各部分(P3000泵、UV3000检测器等)电源。
3、待检测器和泵自检完成后,双击