转氨基作用.ppt

纸层析法观察转氨基作用
王继红
P、63
生物化学实验
11/20/2017
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实验目的
1、学****层析技术
2、掌握氨基酸纸层析
法的基本原理
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层析技术
层析法又称色谱法,是一种根据混合物的物理或化学性质不同(如吸附力、溶解度等)而建立的物质分离、分析方法,是近代生化最常用技术之一。
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层析技术的基本原理
在层析系统(固定相+流动相)中,由于混合物各组份理化性质不同,与两相的相互作用(吸附、溶解等)能力不同,随着流动相不断向前移动,不同组分最终得以分开
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纸层析的分离原理
纸层析是分配层析,是利用混合物在二种或者二种以上的溶剂中总分配系数的不同而使物质分离的方法。
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纸层析原理
以滤纸为支持物,滤纸上纤维为载体,滤纸上结合水为固定相,有机溶剂作为流动相。
滤纸纤维与水亲合力强,能吸收20-22%的水,且其中6-7%的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合,在一般情况下很难脱去,而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力甚弱。
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纸层析法分类
按操作方式分成两类:垂直型和水平型。顾名思义垂直型是将滤纸条垂直悬挂,使流动相向上或者向下扩散。水平型是将圆形滤纸置于水平位置,使流动相溶剂由中心向四周扩散。
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实验原理
转氨基反应是由专一转氨酶催化的α-氨基与α-***酸之间基团互换反应, 广泛存在于机体各组织器官,是体内氨基酸代谢的重要途径。
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实验原理
本实验以丙氨酸和α-***戊二酸为底物,加含有谷丙转氨酶(ALT)的肝匀浆,保温后用纸层析法检查谷氨酸的出现,以证明转氨基作用。
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