苏云金芽孢杆菌40718菌株杀虫晶体蛋白基因的克隆及表达分析.pdf

湖南师范大学
硕士学位论文

究
姓名:张何
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:夏立秋
20030501
摘要��柿5腜�鉴定�甤����虻目寺�克隆到����靥澹�缓笱强寺〉搅縞���畉������穿梭载体本研究对我室选育的苏云金芽孢杆菌�������通用引物���和���进行了��治觯�⒍���腜�柿=�行了��类基因的��猂��治觥M�辈捎蒙�镄畔⒀Х椒ǚ治隽�����瞎ú嫉腸����蛐蛄小8�輈����蚱舳�由嫌蔚耐�����的片段,用��猂��觳庵っ靼��衏����颍�⒔玃�片段化了无晶体突变株。对苏云金芽孢杆菌�����晷��腜���胖柿7直鸹厥眨�胏��号质粒都产生了���哪康钠�危�得髡馊�鲋柿I隙即�衏��嗷�������国家菌种保藏号:����.������腜卜�号质粒用序列以及终止子下游的同源序列设计了一对引物,通过��┰龀鲆桓����上,并在��局斜泶锍隽���的原***,另外还电转实验结果如下:基因通用引物���和���对三种质粒进行了��┰觯琍���因。采用���騊�����ǚ椒ǎ�铣闪讼嘤Φ腜�引物,以��质粒为模板,将扩增出的���产物回收后用������盖校�������、������、���闹制�危�哉漳J交�虻腜�—��鉴定图谱,证明了��的质粒上携带有���基因和���基因。由于���蛋白对鳞翅目�������コ娴牡母叨旧蹦芰Γ�诠�建抗虫工程菌以及抗虫植物方面已经受到��А⒎旱闹厥樱�两裨贕����阂丫�羌橇��謈�痩�基因,本研究阵列比较了�种���基因的���������
处理点���.�������┧笤靥錺�����礁銎�瘟�雍笞;���刈樽觩��在大肠杆菌中的表达关键词:苏云金芽孢杆菌,���颍�蘧�逋槐渲辏��舅兀�┧笤靥�核菅酸序列,发现这些序列具有很高的同源性,并且在���的启动子构基因以及下游终止子的片段,��峁�朐げ饨峁�恢拢����.��接后转化大肠杆菌,获得了正向连接的��和反向连接的���刈樽樱�质粒酶切以及��猂��っ髁丝寺〉恼�沸浴S肂��和��将��、���柿C盖泻蟮缬荆�约梁谢厥�.��钠�危�肂��和��同样根据改进的表达产物纯化方法培养����晏崛”泶锏腃��������瓴�����的原***,,根据这些数据设计了一对引物�—�一�蚉�狾��,用以扩增包含���卜�纹舳�印�����的目的片段,��猂��治鲋っ靼��薱����颉���┰龅�。���卧谄�’端带有一个��肨载体��—�肫淞���玫搅酥刈樽觩��.白,与空白������泶锏鞍椎腟�—��图谱对照,发现���.
凇陒����������瓵����。���������.�������甀��������“�����。���、��������������:�����������甌��一������珹����.��產������猤������猂�����.������,����,����������甌���Ⅱ������痝��������������琣�������.������.������癝������甌���騛�������甀�
珹�������,��������������.������琣�����������、����������.�������,���甇��������������瑃�����—��������甀����瓵��������琍��一��—�一�瑆������.����甈�—����—�甌����������������瓹����������甋�������猂�����,���.��、�������.
,�������������������,���瓻����������������������瓵���狿���』�����琣����瓼������,�������������,
驮����府����哂薪衔L匾斓纳背婊钚浴�’”们;同所编码蛋白的杀虫活性的特点提出了一个�婊�蚍掷嘞低常��引言对鳞翅目�������⑺ǔ崮�刀劫���⑶食崮�����,�、�杀虫晶体蛋白基因��杀虫晶体聋白基因的分类日、���运ǔ崮俊ⅰ髏***对双翅目具有特异的杀虫活性¨。�鳌埃�靏』��』��虺艬�是一种种。它的特点是在形成芽孢的同时能产生一种蛋白性质的伴孢晶体������虺艻��⋯,和食毛目������等多种昆虫以及线虫������Ⅱ��态效益,所以已经被开发成为世界上应用最为广泛的生物杀虫剂。个杀虫晶体蛋白的编码基因�����⒂���攴⒈砹怂�暮��獁系统,将当时已经克隆的�种基因分为���啵�渲蠧��的���虻