动力学亲和力.ppt

动力学/亲和力分析
基础知识介绍
什么是动力学和亲和力?
动力学
反应发生的速度? –与时间相关
结合–分子间结合的速度
解离–分子复合物解离的速度
动力学分析能够确定在一个给定的时间跨度内,分子复合物是否能够结合还是完全解离
亲和力
分子间结合的强度? –与时间无关
亲和力分析能够确定反应处于平衡状态(结合与解离形成动态平衡)时,复合物的浓度
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动力学分析和亲和力分析的相关性?
细胞本身就是一个动态系统–极少处在平衡状态
同样的亲和力,不同的反应,动力学数据一般并不相同
动力学数据提供了更多的信息
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同样的亲和力,不同的动力学
所有4个化合物的亲和力数据相同 KD = 10 nM = 10-8 M
结合动力学常数可有不同数量级范围内的改变,本例中为4个数量级
kon koff
(M-1s-1) (s-1)
106 10-2
105 10-3
104 10-4
103 10-5
时间
浓度= 1000 nM
30 min
60 min
所有靶位点被占据
Response
时间
30 min
60 min
浓度= 100 nM
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用Biacore获得动力学和亲和力数据的3种方式
监测结合和解离速率
亲和力动力学
监测稳态水平
亲和力动力学
监测溶液中游离的分析物分子
亲和力动力学
Yes
Yes
Yes
Yes
No
No
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1:1 动力学模型的速率方程
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平衡常数(Equilibrium constants)
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Biacore中的平衡和动力学
A 是溶液中的待分析物(analyte)
A的游离浓度由流动系统控制,在检测中保持恒定
AB 是结合复合物
AB的浓度可通过直接检测RU得到,表示为R
B 是偶联在传感芯片上的分子
总浓度能用 RU表示, 相当于最大结合反应理论值 Rmax
B的游离浓度即 Rmax-R
A + B  AB
ka
kd
我们无需知道复合物和配体的实际浓度!
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Biacore中的速率和亲和力
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传感图中的变量和表示方式
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