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TRAIL与DDP联合诱导急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究
作者:毕林涛高长斌宿晓云卢振霞
【摘要】 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与顺铂(DDP)联合应用对急性淋巴细胞白血病细胞的抑制作用,为白血病的临床治疗提供新思路。MVTRAIL,用脂质体法进行细胞转染,MTT法检测单独或联用TRAIL及DDP处理的各组肿瘤细胞的增殖变化,FCM技术检测细胞凋亡变化。结果DDP组、TRAIL转染组及联合用药组细胞增殖抑制率均高于空白对照组(均P<),且联合用岜药组高于单独用药组(P<);FCM示铁凋亡率也明显增高。结论TRAIL和D杼DP联用可抑制急性淋巴细胞白血病细胞囹增殖,具有协调作用。
【关键词】 肿尝瘤坏死因子相关凋亡诱导配体;顺铂;急报性淋巴细胞白血病;凋亡
肿瘤坏死因子仵相关凋亡诱导配体属于Ⅱ型跨膜蛋白质,飑具有在体外或体内大量、快速诱导凋亡的法作用。与其他可诱导凋亡的物质不同,T〔RAIL能够选择性杀伤肿瘤细胞,而正仨常细胞可逃逸其诱导凋亡的作用,这引起炝了众多研究者的兴趣。当TRAIL与一っ些能诱导DNA损伤的方法,如化疗或放鸡疗联合应用时,可增强其诱导凋亡的能力祖〔1,2〕。目前国内外学者已有应用T
糇RAIL联合顺铂、依托泊甙、阿霉素、氟尿嘧啶、丝裂霉素等化疗药物处理胶质禀瘤细胞、间皮瘤细胞、结肠癌细胞以及肝豇癌细胞的研究报道〔1,3~5〕,但联炝合应用诱导凋亡的机制尚未完全阐明。本魁研究将单独或联合使用TRAIL及化疗我药物顺铂(DDP),观察不同方案对J篑urkat细胞体外增殖的抑制作用,以尉确定DDP与TRAIL联合应用是否具有协同效应,并对其机制进行初步探讨。
 1 材料与方法
 实验材料 RPM龃I1640培养基、胎牛血清购自Gib坡co公司;脂质体2000购自Invi泸trogen公司;PI染色试剂盒购自瘐北京鼎国生物科技有限公司;顺铂注射液诶购自江苏豪森公司;MTT购自Sigm坪a公司;人T淋巴细胞白血病Jurka飑t细胞株由实验室自行保存并培养;MVTRAIL由本实验轩室自行构建并保存,已将TRAIL基因蔹克隆至CMV启动子之后。
 实验方法
 Jurkat细胞培养及转染 人T淋蒡巴细胞白血病细胞株Jurkat系本实喙验室常规培养,生长于含10%胎牛血清昆的RPMI1640完全培养液中,37钝℃、5%CO2培养箱中生长。
取对数生长期细胞,离心后用无抗生素的培养基箪稀释,以2×106细胞/ml浓度接种け到培养板中,用Lipofectami翌ne2000进行转染,96孔板中每孔焚加入Lipofectamine2000μl,质粒μg;6孔板每孔加入Li缇pofectamine200010μ篮l,质粒4μg。具体操作按试剂说明书铹进行。转染4h后离心换液去除脂质体,继续培养24h。
 化疗药物亚细胞毒峪剂量浓度的测定 取对数生长期细胞,以砍2×106细胞/ml浓度接种至96孔霖培养板中,每孔200μl。加入不同浓攴度DDP,终浓度分别为100、50、梢25、、、μg/ml,空白对照组加入揩等体积培养基,各组设3复孔,加药24深h后进行MTT检测。每孔加入5g/L找MTT20μl,37℃孵育4h,洗净凯孔中液体,加入200μlDMSO,待鲨MTT结晶充分溶解后