Hela细胞传代培养.doc

Hela细胞传代培养实验目的:掌握动物细胞培养的基本原理和方法。实验用具:每组用具(移液枪一把,一盒枪头,长吸管一包(4-6根),培养瓶1个【4-8人为一组,看细胞数量来定,传代比例1;2最多1:3】。实验药品:%胰酶,D-Hanks,1640培养基实验原理:HeLa是HenriettaLacks的简称,HenriettaLacks是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字,在她死后,该细胞走被广泛散发到各研究机构,并无限次地繁殖分裂下去。实验前的准备:培养基的配置:RPMI-、链霉素各100单位/毫升加三蒸水至1000ml,过滤除菌。(终浓度10%)消化液的配置:胰蛋白酶是一种黄白色粉末,用灭菌的D-hanks配置。%。用滤器过滤除菌D-hanks配方:******(Na2HPO·7H2O)。。血清的准备与添加优质血清的标准:透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌、支原体、病毒污染。血清的灭活(消除补体活性):56℃水浴,30分钟培养用具的准备:所用器具高压灭菌,D-hanks缓冲液。酶液,培养液。实验步骤:,把实验中所需用具放到超净台上。%胰酶、培养基。可以把胰酶和培养基的瓶盖拧松备用。,倒掉旧的培养基,移液枪加入胰酶2ml(加入的量以覆盖整个细胞培养面为宜)。-2分钟后迅速将消化液倒掉。注意:此步消化时间需要根据每次培养的细胞不同状态灵活掌握,没有固定时间。消化时间长短是实验成败的关键,宁可短消化,不能过消化。否则细胞会变死。在倒置显微镜下观察,当细胞质回缩,