叶绿体色素的提、分离、理化性质和叶绿素含量的测定.ppt

叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定省培项目一、实验目的和要求:掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法。二、实验内容和原理:以菠菜为材料,提取和分离叶绿体色素并进行理化性质分析和叶绿素含量测定。1、叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂,常用95%的乙醇或80%的***提取。2、叶绿素的荧光现象透射光下呈绿色反射光下呈暗红色3、H2CHCH3R1—H3CH3C——H2CHCH3R1—H3CH3C——CH3褐色绿色C32H30ON4MgCOOCH3COOC20H39+2KOHC32H30ON4MgCOO—COO—+2K++CH3OH+C20H39OH4、皂化反应??5、定量分析:叶绿素吸收红光和兰紫光,红光区可用于定量分析,其中665和649用于定量叶绿素a,b及总量,而652可直接用于总量测定abRelativeabsorbtanceWaverlength(nm):取鲜叶3-5g+95%乙醇15-25ml(逐步加入),磨成匀浆过滤入三角瓶中观察荧光现象透射光色,反射光光。皂化反应(约1ml)加KOH数片剧烈摇均,加石油醚1ml和H2O1ml分层后观察上层呈色,为,吸收光。下层呈色,为,吸收光。取代反应(约1mL)加醋酸约1ml,变褐为_________叶绿素,取1/2加醋酸铜粉,加热变色,为叶绿素。定性实验无需移液管量2、叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定:皂化反应的上层黄色石油醚溶液弃上层,反复用石油醚萃取,直到无类胡萝卜素,得叶绿素(盐)在400-700nm处扫描光谱,分别测定类胡萝卜素和叶绿素的吸收峰(-1)(稀释,-1)