PEG沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒.doc

PEG沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒————————————————————————————————作者:————————————————————————————————日期: PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒文章来源: 2006-7-1818:54:14 PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒第四军医大学学报2000年第21卷第1期张文清马文煜骆文静姜绍谆胡艳冰侯悦张进于碧云摘要:目的建立一种简便、 PV1Henan株在Hep-2细胞中增殖后用聚乙二醇(PEG)-PCR和透射电镜(TEM) ·L-1的PEG6000沉淀病毒的感染性回收率(PFU计数)%,提纯系数(PF)为106,再经差速离心(16000g30min,)%- PEG6000结合差速离心的方法较之蔗糖密度梯度区带离心方法易于操作,且比单独PEG沉淀有更高的纯化系数,是一种简便、有效的方法. 关键词:脊髓灰质炎病毒;病毒分离与纯化;聚乙二醇;离心法 0 引言影响水中病毒消毒效果的因素很多,除了病毒的生物学特性、消毒剂的性质与剂量以及环境温度外,还有水中病毒聚集性、水质酸碱度、离子强度以及病毒周围有机物等[1].包绕在病毒周围的有机物,尤其是蛋白类,不仅为病毒提供物理屏障,使消毒剂不易穿透至作用靶点,而且有机物中许多化学基团如巯基还可与氧化性消毒剂产生反应,[2]报告,臭氧灭活Hep-(CT值)较灭活游离于细胞外的这两种病毒高约150倍,因此在人工制备病毒污染水样时要经过反复冻融感染细胞、超声粉碎、低速离心沉淀细胞碎片以及其它特殊沉淀病毒蛋白、、超声粉碎、低速离心以去除细胞碎片,并进一步用PEG6000沉淀病毒蛋白、差速离心提纯PV1病毒. 1 材料和方法 材料电子显微镜,JEM-2000EX型,日本电子公司;高速冷冻离心机GL-20A型,湘西仪器仪表厂;超速离心机,Centrikont-2080型,[3],PEG6000,日本进口,天津天秦公司分装. 方法细胞培养与病毒感染按我们先前的方法[3].接种病毒3~5d出现严重CPE(>)后反复冻融细胞5~6次,(S0)在4℃环境经4000r·min-1离心30min后弃沉淀(P1),留上清(S1):在S1中缓慢滴加400g·L-1PEG6000溶液至PEG终浓度为70g·L-1,并随时搅拌、℃过夜后,8000r·min-1离心30min后弃上清(S2),留沉淀(P2).差速离心:·L-℃12000r·min-1(16000g)离心30min后弃沉淀(P3),上清(S3)再