PCR检测方法分性能评价 课件.ppt

PCR检测系统分析性能验证 1 2017-3-24 相关规定?医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域 AS-GL xx ) 、精密度、可报告(或线性)、特异性或符合率及重复性?上海市医疗机构临床基因扩增检验技术审核办法临床基因扩增检验实验室在技术审核前应完成拟开展检测项目方法学验证。方法学验证实验应包括但不限于:精密度、正确度、检测限、线性范围、可报告范围、特异性试验 2 2017-3-24 什么情况下要做性能验证?开展新项目?更换检测系统:更换仪器或试剂 3 2017-3-24 分析性能验证项目?对配套系统,一般验证以下指标精密度准确度可报告范围参考区间?对非配套系统除验证上述指标外分析灵敏度分析特异性 4 2017-3-24 依据文件(CLSI 文件) ?EP5-A2: 定量测量方法的精密度性能评价?EP6-A: 定量测量方法的线性评价?EP7-A: 临床化学的干扰实验?EP9-A2: 用患者样本进行方法学比对及偏倚评估?EP12-A2: 定性实验方法评价用户协议?EP15-A2: 用户对精密度和准确度核实试验?EP17-A: 检出限和定量检出限确定方案?C28-A2: 医学实验室参考区间的定义和确定 5 2017-3-24 性能验证前的准备?应熟悉待验证的检测系统?应熟悉验证方案的步骤(PCR 检测项目成本高、阳性标本来源困难,精密度和正确度验证可以采用 EP15-A2 文件)?制定质量保证措施?确保足够的样本数量和覆盖较宽检测范围?确定比较方法 6 2017-3-24 EP15-A2: 精密度和准确度性能的用户验证?实验室验证方法的操作与厂家的申明一致?为验证重复性、实验室内精密度的申明提供方案和数据分析?其他的 CLSI 文件为厂家做出精密度(EP5-A2) 和准确度(EP9-A2) 的申明提供指南 7 2017-3-24 精密度验证?重复性:指在相同条件(时间、操作者、仪器)下获得的精密度,也称批内精密度?实验室内精密度:同一实验室内,使用相同的设备,在不同时间内获得的精密度,也称总精密度.(不包括大的设备维护、仪器校准和更换试剂批号等) 8 2017-3-24 实验要求?试剂:同一批号?实验样本以前分析过的病人样本其他已知值的物质浓度要求:医学决定水平厂家说明书精密度指标所用浓度内容重复性实验室内精密度 9 2017-3-24 实验步骤?根据厂家申明的精密度比例关系可分为 3种情况: 1) 如果σ批内<2/3 σ总:每天分析 1批次,2个浓度,每个浓度重复测定 4次,连续 5天. 2)如果σ批内>2/3 σ总:每天分析 1批次,2个浓度,每个浓度重复测定 3次,连续 3天. 3)如果σ批内与σ总相对关系未知:每天分析 1批次,2个浓度,每个浓度重复测定 4次,连续 5天. ?每天做室内质控,如果失控,剔除数据,重新进行测定?实验数据的统计学处理:批内标准差、实验室内标准差 10 2017-3-24