中缅树鼩分子标记方法的建立及其遗传多样性分析.pdf

硕士学位论文学校代码:icdiVersi够inTreeShrews(脚乜觑曰砒,秽Ⅳ仍扬阴s动所院医学生物学研究所姓名黎家敏指导教师:孙晓梅导师小组:代解杰唐东红学科专业:动物学研究方向:医学实验动物学完成日期:2010年5月删蚴㈣㈣Y17757石§。(三)实验方法?????????????????19二、实验结果??????????????????..20(一)微卫星DNA多态性的检测????????????.20(二)群体的遗传多样性的分析????????????.21(三)微卫星座位的等位基因大小判定、测序及序列比对?????22三、讨论????????????????????25(一)种群遗传多态性的度量?????????????25(二)微卫星座位的序列分析?????????????26小结?????????????????????.27参考文献????????????????????29论文综述????????????????????32附录????????????????????..43致谢?????????????????????46研究生简历???????????????????.471359999O2233668888中国医学科学院&北京协和医学院硕上研究生毕业论文摘要树嗣作为新兴的模式动物之一,因其在进化地位上与灵长类动物亲缘关系较为接近,且体型小,易驯养,繁殖能力强,以及存在诸多自发性疾病等特性,可作为某些人类重大疾病研究的动物模型,在医学生物学上已呈现出广泛的应用前景。目前,树踟己被应用于病毒、神经、免疫、肿瘤和社会生物学的研究,表现出对其应用研究多于基础研究的状态,遗传背景研究就更为少见,不利于实现实验动物标准化。本研究结合不同遗传标记方法的优点,分别采用黜廿D(R觚dom锄plifiedpolymorpllicDNA)和微卫星DNA两种分子标记方法分析中缅树鼢种群的遗传结构并评估其遗传多态性,为开展树昀繁育工作与实现实验动物标准化提供一定的理论基础和遗传检测方法。针对目前树鼢基因组信息未知,可供参考的遗传信息匮乏等问题,首先通过建立树询砒”D遗传标记分析方法,了解树鼢种群的遗传多样性。采用PCR技术对40条随机引物进行优化,筛选出能有效用于树晌群体遗传分析的凡心D位点,对48只树嗣个体的基因组DNA进行PCR扩增;。20个扩增效果理想的&廿D引物在48个树晌个体中共检测到113个位点,,其中多态位点数为69个(%)。,~,。雄性群体的遗传多态度(Ho)()略高于雌性群体(),平均遗传多态度(HpoD);%,而雌、%。NJ法进行聚类分析得出T15、T33和T47号树嗣个体聚类成一大类,其余45只树铜个体聚成另一大类,雌、雄个体呈相互交叉现象。实验结果表明,本研究的树嗣群体具有较好的遗传多样性,实验所筛选的20条随机引物和建立的凡”D标记方法可有效用于树韵种群的遗传结构分析和遗传变异监测。为了进一步研究中缅树趵种群的遗传背景,结合微卫星DNA标记具有高度的多态性、共显性遗传、易于PCR稳定扩增等特点,参考国外学者从其它种类的树踟分离的少数微卫星座位引物,建立微卫星遗传标记方法分析树购种群的遗传多态性,并与RAPD方法得出的结果作相互验证。通过利用11个微卫星座位对60只中缅树踟进行PCR扩增及12%非变性(中性)聚丙烯酰***凝胶电泳检测微卫星DNA的扩增产物,筛选出9个能扩增出清晰、稳定条带的微卫星位点,并计算其等位基因数、等位基因频率、多态性信息含量(尸,c)、基因杂合度等指标。9个微卫星基因座共检测到51个等位基因,。TG22座位的杂期望合度值(日)最高,,,。各微卫星座位的多态信息含量值(尸,C)~,,表明该树晌种群具有较高的遗传多样性。选取6个微卫星基因座的PCR扩增产物进行中国医学科学院&北京协和医学院硕上研究生毕业论文序列测定分析,出现(AC)n或(AC)n的完全和不完全的核心序列;各座位同源性比对的变化范围为75%~93%。结果表明,筛选的9个微卫星基因座具有较丰富的遗传中国医学科学院&北京协和医学院顾士研究生毕业论文AbstractAsoneofeme嘻nga11im