徒手切片法.doc

用新鲜材料制作切片的徒手切片法作徒手切片不需要复杂的设备,只需要一把锋利的剃刀或一片刀片就可以进行, 方法简单, 而且易于保持细胞的生活状态。徒手切片法所作的切片通常不经染色或经简易染色后,封藏于水中即可观察。用剃刀切片, 材料不能太大, 一般以表面不超过 3-5mm2 为宜。切片最要紧的是平而薄, 无需很完整, 比如茎的横切面, 无需切片整圆形, 只需一角就够了。所有切片前的准备工作, 如截取材料、削平切面, 都应使用解剖刀或用过的刀片, 不可用剃刀, 以保持剃刀的锋利。为了成功地切片, 应掌握正确的用刀方法。一般用左手的大拇指、食指和中指三个手指捏住材料, 使材料突出在指尖之上, 避免切片时割伤手指; 用右手平稳地拿住剃刀, 把刀口放在经解剖刀削平的材料平面中间, 轻轻地压住它, 以均匀的动作, 从剃刀刀口下方起, 斜着向后拉切。切时要用臂力而不是腕力, 并且不必太用力, 否则就不易切薄。在切的过程中, 决不能以剃刀直接挤压材料, 或以剃刀来回拉割材料, 并且要始终保持材料与剃刀在水平状态, 否则会由于切面偏斜而影响观察。切下的切片应该薄而透明,形状则不要求非常完整, 可以用刀不同的部位一次作几个切片,然后用蘸水的毛笔取下切片, 置于盛水的培养皿中。有些较柔嫩的器官, 例如幼叶, 难以直接拿住进行切片, 因而需借助一些维持物, 一般用胡萝卜根或土豆块茎作为维持物, 把要切的材料夹于其中, 进行切片, 以利于把握操作。将切下的薄片放在载玻片上时, 要先在玻片中央加一滴水, 把材料放到水滴中, 然后用镊子夹住盖片, 将盖片的一侧先接触到载玻片中央的水滴, 然后用镊子顶住盖片的另一侧, 慢慢放下, 使盖玻片与载玻片之间充满水,如有气泡,要掀起盖片,重新放置。徒手制作的切片可以直接在光镜下观察,也可以经过简易的染色, 以使结构看得更清楚。常用的染料有: % 亚***蓝、 -1% 中性红或 1% 番红水溶液等。染色的方法是将切片放在载玻片上后, 用吸水纸吸去多余的水分, 滴上一滴染料, 经过 1-2 分钟后, 用水冲洗一下,盖上盖玻片,在显微镜下观察。若要更清楚地显示其组织和细胞结构,可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤,做成永久玻片标本。