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细胞生物学(四)自编实验试题.doc


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细胞生物学实验指导苏州大学药学院生物制药教研室 2009 年2月目录第一节普通光学显微镜的结构与使用第二节细胞膜的通透性和细胞的吞噬活动观察第三节植物细胞骨架的观察第四节线粒体的超活染色与观察第五节细胞培养技术第六节细胞融合第一节普通光学显微镜的结构与使用【目的要求】 1 、熟悉普通光学显微镜的主要构造及其性能。 2 、掌握低倍镜及高倍镜的使用方法。 3 、初步掌握油镜的使用方法。 4 、了解光学显微镜的维护方法。 5 、观察人血涂片,鼠肾脏切片,兔脊神经切片,马蛔虫子宫切片,兔肝脏切片,稻蝗虫精巢切片,洋葱根尖纵切片。【实验原理】光学显微镜(light microscope) 是生物科学和医学研究领域常用的仪器, 它在细胞生物学、组织学、病理学、微生物学及其他有关学科的教学研究工作中有着极为广泛的用途,是研究人体及其他生物机体组织和细胞结构强有力的工具。光学显微镜简称光镜, 是利用光线照明使微小物体形成放大影像的仪器。目前使用的光镜种类繁多,外形和结构差别较大,有些类型的光镜有其特殊的用途,如暗视野显微镜、荧光显微镜、相差显微镜, 倒置显微镜等, 但其基本的构造和工作原理是相似的。一台普通光镜主要由机械系统和光学系统两部分构成,而光学系统则主要包括光源、反光镜、聚光器、物镜和目镜等部件。光镜是如何使微小物体放大的呢?物镜和目镜的结构虽然比较复杂, 但它们的作用都是相当于一个凸透镜,由于被检标本是放在物镜下方的 1~2 倍焦距之间的,上方形成一倒立的放大实相, 该实相正好位于目镜的下焦点( 焦平面) 之内, 目镜进一步将它放大成一个虚像, 通过调焦可使虚像落在眼睛的明视距离处, 在视网膜上形成一个直立的实像。显微镜中被放大的倒立虚像与视网膜上直立的实像是相吻合的, 该虚像看起来好像在离眼睛 25cm 处。分辨力是光镜的主要性能指示。所谓分辨力(resolving power) 也称为辨率或分辨本领, 是指显微镜或人眼在 25cm 的明视距离处, 能清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力, 即分辨出标本上相互接近的两点间的最小距离的能力。据测定,人眼的分辨力约为 100 μm。显微镜的分辨力由物镜的分辨力决定, 物镜的分辨力就是显微镜的分辨力, 而目镜与显微镜的分辨力无关。光镜的分辨力( R)(R 值越小,分辨率越高)可以下式计算: 这里 n 为聚光镜与物镜之间介质的折射率( 空气为 1、油为 );?为标本对物镜镜口张角的半角, sin 的最大值为 1;?为照明光源的波长( 白光约为 )。放大率或放大倍数是光镜性能的另一重要参数, 一台显微镜的总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。【器材与试剂】普通光学显微镜、擦镜纸、香柏油或液体石蜡(石蜡油) 、羊毛交叉装片、英文字母或数字的装片、清洁剂(*** 7份+ 无水乙醇 3份) 、二甲苯。【内容与方法】一、光学显微镜的基本构造及功能(一)机械部分 1 、镜筒: 为安装在光镜最上方或镜臂前方的圆筒状结构,其上端装有目镜,下端与物镜转换器相连。根据镜筒的数目, 光镜可分为单筒式或双筒式两类。单筒光镜又分为直立式和倾斜式两种。而双筒式光镜的镜筒均为倾斜的。镜筒直立式光镜的目镜与物镜的中心线互成 45 度角,在其镜筒中装有能使光线折转 45 度的棱镜。 2 、物镜转换器: 又称物镜转换盘。是安装在镜筒下方的一圆盘状构造,可以按顺时针或反时针方向自由旋转。其上均匀分布有 3~4 个圆孔,用以装载不同放大倍数的物镜。转动物镜转换盘可使不同的物镜到达工作位置(即与光路合轴) 。使用时注意凭手感使所需物镜准确到位。 3 、镜臂: 为支持镜筒和镜台的弯曲状构造,是取用显微镜时握拿的部位。镜筒直立式光镜在镜臂与其下方的镜柱之间有一倾斜关节,可使镜筒向后倾斜一定角度以方便观察,但使用时倾斜角度不应超过 45度, 否则显微镜则由于重心偏移容易翻倒。在使用临时装片时, 千万不要倾斜镜臂,以免液体或染液流出,污染显微镜。 4 、调焦器: 也称调焦螺旋,为调节焦距的装置,位于镜臂的上端(镜筒直立式光镜) 或下端(镜筒倾斜式光镜) ,分粗调螺旋(大螺旋)和细调螺旋(小螺旋)两种。粗调螺旋可使镜筒或载物台以较快速度或较大幅度的升降,能迅速调节好焦距使物像呈现在视野中, 适于低倍镜观察时的调焦。而细调螺旋只能使镜筒或载物台缓慢或较小幅度的升降( 升或降的距离不易被肉眼观察到) ,适用于高倍镜和油镜的聚焦或观察标本的不同层次,一般在粗调螺旋调焦的基础上再使用细调焦螺旋,精细调节焦距。有些类型的光镜, 粗调螺旋和细调螺旋重合在一起, 安装在镜柱的两侧。左右侧粗调螺旋的内侧有一窄环,称为粗调松紧调节轮,其功能是调节粗调螺旋的松紧度(向外转偏松, 向内转偏紧) 。另外,在左侧粗调螺旋的内侧有一粗调限

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