铁皮石斛人工杂交育种快繁技术.doc

铁皮石斛人工杂交育种快繁技术张志勇,梁金平,周美玲,黄萍萍,吴文明(福建省龙岩市农业科学研究所,福建龙岩 364000 ) 摘要: 通过人工授粉获得铁皮石斛蒴果,再以蒴果种子为源材料进行组培快?试验,结果表明, 人工杂交育种结果率达 83% ;组培试验中种子萌发最佳培养基为 1/2MS+ 蛋白胨 2 g/L ,发芽率达到 95% ;原球茎增殖培养基为 1/2MS+6-BA mg / L+NAA mg / L+15% 马铃薯, 增殖系数达到 ; 壮苗生根培养基为1/ 2M S +NAA mg / L+15% 香蕉, 苗高 cm , 根数 条; 组培苗在移栽成活率达 90% 以上。关键词: 铁皮石斛;杂交育种;组培快繁;移栽铁皮石斛( Dendrobium officinale ) 又名黑节草, 为兰科石斛属多年生常绿草本植物, 是一种名贵药材,在《道藏》中被列为中华九大仙草之首。铁皮石斛主要药用成分为石斛多糖, 具有提高人体免疫功能、抗衰老、防治肿瘤和心血管疾病以及改善睡眠、防治白内障等疾患的功能。但铁皮石斛种子极小, 无胚乳, 自然条件下需与某些真菌共生才能萌发, 自然繁殖率极低, 加上人为地过度采集和自然环境破坏, 目前我国野生铁皮石斛资源几乎绝灭, 已被列为国家二级保护植物。龙岩市连城县冠豸山等地野生铁皮石斛资源也有悠久的历史,但每年采集量急剧下降。为了保护珍稀铁皮石斛野生资源和促进铁皮石斛的开发利用, 笔者采用现代生物组织培养技术, 对铁皮石斛开展了人工杂交育种、种胚离体培养和快速繁殖、组培苗移栽等关键技术的研究。其研究结果如下。 1 材料与方法 人工杂交育种铁皮石斛系雌雄合生蕊柱。用牙签挑去白色的药帽露出黄色的花粉粒, 用牙签蘸取花粉粒,将蘸住花粉粒的牙签尖轻轻接触母本雌蕊的凹陷处, 使蘸上花粉粒, 以不损坏合生蕊柱为原则。试验设 4 种授粉方式(表 1):①自花授粉;②异花授粉;③开花后 2~5d 异花授粉; ④开花后 6~9 d 异花授粉。 种胚萌发 蒴果采收 11~ 12 月是铁皮石斛蒴果成熟时期,当蒴果外表转浅黄绿色、达到发育成熟而尚未开裂时采收。 蒴果处理蒴果用 75% 酒精果实表面消毒 30s, 无菌水冲洗 3 次,用 % 升***消毒 10 min ,无菌水漂洗 3 次,在无菌条件下,将处理过的果实切开一个口子, 取出种子经在解剖镜下计数后, 分别撒播在 4 种诱导培养基(表 2)上, 每种培养基播种 5瓶, 每瓶播种 20 粒种子, 观察统计萌发率、萌发时间、生长势等。 原球茎增殖培养在前人研究的基础上, 在增殖培养基中添加天然有机营养物(表 3) 。将种子诱导产生的原球茎分别接种在 6 种培养基上(表 3),每种培养基接种 5瓶, 每瓶接种 10 个原球茎, 培养 50 天后统计原球茎的增殖倍数。在培养过程中, 观察生长状况等。 壮苗生根培养当原球茎分化的幼苗 2~ 3 cm 时, 移入 4 种生根培养基中进行生根培养(表 4), 60d 后观测记载苗高、根系条数和根系长度。每种培养基接种 100 株幼苗, 3 次重复。 组培苗移栽移栽前瓶苗炼苗 10d, 适应自然环境后, 选取肉质茎有 3~4 个节间、长有 4