以基因芯片技术研究马齿苋多糖对糖尿病模型小鼠胰岛基因表达的影响.doc

1 以基因芯片技术研究马齿苋多糖对糖尿病模型小鼠胰岛基因表达的影响作者:周春丽,李玉萍,刘建涛,胡娜,刘华,苏虎【摘要】目的探讨马齿苋多糖( PPS )对糖尿病小鼠预防作用的分子机制。方法应用基因芯片技术比较 PPS 处理组和生理盐水对照组糖尿病小鼠的基因表达差异。结果 PPS 组上调基因 1条, 下调基因 1条, 上调基因和糖尿病的发生有关, 下调基因和氧化还原法应相关。结论马齿苋多糖能预防或延缓糖尿病小鼠糖尿病的发生。【关键词】马齿苋多糖; 糖尿病; 基因芯片 Abstract : ObjectiveTo investigate the molecular mechanism underlying the preventive effect of Portulace oleracea haride on diabetes mellitus in mice. MethodsIn order to explore the gene expression profiles of Portulace oleracea haride mice ’s islet cells treated with PPS,cDNA microarray technique was applied. Results1 gene 2 up-regulated was related to diabetes mellitus ,1 gene down-regulated was oxidation-reduction oleracea haride probably prevent or delay diabetes mellitus in mice. Key words : Portulace oleracea haride ; Diabetes; Gene chip 糖尿病( diabetes mellitus, DM) 是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的体内糖、蛋白质及脂肪代谢紊乱, 以持续高血糖和伴发多种并发症为特征的一种临床综合征。主要分为1型( 胰岛素依赖型糖尿病,insulin-dependent diabetes mellitus, IDDM) 和2型( 胰岛素非依赖型糖尿病,non-insulin-dependent diabetes mellitus, NIIDM) 。1 型糖尿病是一种在遗传基础上由环境因素触发的慢性自身免疫性疾病,以胰岛β细胞特异性损伤,不能合成和分泌胰岛素为特征; 2 型糖尿病是因胰岛素分泌相对不足或外周组织的胰岛素抵抗所致,占***患者的 95% 以上[ 1,2] 。虽然目前对糖尿病发病机理的认识还不十分清楚, 但多年来许多学者的研究结果表明无论是1 型还是2 型糖尿病都存在功能性胰岛β细胞的缺失现象,并伴有相同的并发症,同时,针对相关调控基因人们也在研发大量新药。然而, 迄今为止, 除胰岛 3 移植治疗外治疗糖尿病药物多为单一效应,只能控制血糖, 并不能防止高血糖累积肾脏、神经、视网膜、心血管等所致的糖尿病慢性并发症( diabetic plications, DCC )的发生,包括失明、心脑血管疾病、肾功能衰竭、神经病变等。马齿苋多糖( Portulaca oleracea ,PPS) 是马齿苋的主要有效成分[3], 具有提高人体免疫力、防治癌症、抗氧化、抗衰老等作用[4~6]。用 PP S 预处理小鼠可以明显降低糖尿病模型小鼠的血糖和改善其糖耐受量异常,且与 PPS 浓度和时间成正相关性[ 7]。本研究运用基因芯片技术, 观察 PPS 对糖尿病模型小鼠胰岛基因表达的影响。 1 材料与仪器 原料新鲜马齿苋 Portulaca oleracea 2005-0 9 购于江西南昌市农贸市场, 经本校药学院药理学教研室鉴定。用清水洗净,沥干水分, 80℃鼓风干燥 6h ,粉碎备用。准确称取马齿苋粉末 50g ,按照 1∶ 30(W ∶ V) 加入蒸馏水,水煎煮 3 次( , , h), 过滤, 合并 3 次提取液, 浓缩提取液, 冷却后 4 000 r/min 离心 15 min , 取上清液, 以无水乙醇调制 4 终浓度为 75 %, 4℃静置过夜,沉淀物再分别以无水乙醇、***、***回流洗涤, 得灰白色粗多糖粉末, 以适量蒸馏水溶解粉末,置4℃冰箱备用。临用时用蒸馏水配制成 和2 mmol/L 粗多糖溶液。 动物 4 周龄昆明糖尿病小鼠 20 只( 20~ 22g ,雄性,购自江西省医学实验动物中心) ,经随机编号进入① PPS 处理组( 10只) ,口服 PPS 2 mmol/L