内障丸对抗精子抗体阳性大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响.doc

1 内障丸对抗精子抗体阳性大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响【摘要】目的探讨内障丸对抗精子抗体阳性大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响。方法将 Wistar 雌性成年大鼠随机分为 6 组。中药低剂量组(内障丸) 、中药高剂量组(内障丸)、中药对照组( 六味地黄丸)、西药对照组( 醋酸泼尼松片) 、模型组、空白组。从第 1 次免疫后 1 周开始给药, 连续 3周。之后检测内障丸对妊娠第 3 天大鼠子宫一氧化氮合酶表达的影响。结果内障丸可明显提高大鼠交配后第 3天子宫一氧化氮合酶表达,提高大鼠的窝产仔鼠数。结论内障丸能改善子宫内环境,有利于受精卵着床。【关键词】内障丸抗精子抗体一氧化氮合酶 Abstract : ObjectiveTo investigate the expression of iNOS in uterus of antisperm antibody rats treated by NEiZhang femal wistar rats were randomly divided into 6 groups:NEIZhang pill low dose group;NeiZhang pill high dose group;Liuweidihuang pill control group;Prednisone control 2 group;model group;normal group. The rapy began after the first immune and the expression of iNOS was measured after 3 weeks ’ pill could promote the expression of iNOS in uterus and enhance the fetiferous pill can improve internal uterus environment,facilitate fertilization and implantation. Key words : NeiZhang pills; Antisperm antibody; iNOS 抗精子抗体( AsAb ) 阳性不孕约占不孕患者的 20% ~ 30% , 具有较高的发病率。 AsAb 可以通过不同的环节影响生殖过程导致不孕和流产。本实验通过观察内障丸对 AsAb 阳性大鼠受孕后子宫一氧化氮合酶( iNOS ) 的影响, 探讨内障丸对子宫 iNOS 的作用机制。为中药治疗 AsAb 阳性流产及不孕提供理论依据。 1 材料与方法 材料 动物 3 Wistar 雌性成年大鼠,体重( 180 ± 10) g, 鼠龄 10 周, 成年雄性 Wistar 大鼠,体重( 250 ± 20)g ,购自黑龙江中医药大学实验动物中心。 药物内障丸,6 g/袋, 黑龙江中医药附属第一医院制剂室提供, 批号: 031016 。六味地黄丸, g/丸, 每丸相当于原药材 3g, 吉林济邦药业有限公司产品。醋酸泼尼松片 5 mg/ 片,上海信谊药业有限公司产品。硫酸庆大霉素 8万 u/只, 批号 031026 ,上海第一生化药业公司产品。 试剂鼠抗人精子抗体酶免试剂盒由北京华美生物技术公司提供, 实验所需其它化学试剂耗材均由哈尔滨市医药公司化学试剂批发站提供。 方法 精子膜抗原提取 4 取正常人精液弃精浆, PBS 离心洗涤 5 次,混悬于含 %NP-40 的 Tris-HCl 缓冲液,置4℃放置 1h。 12 000 r/mi n 离心 30 min , 取上清到透析袋,以 PBS 过夜透析, 双缩脲法测蛋白浓度, -20 ℃保存备用。 动物模型建立[ 1] 用提取的膜抗原伴等体积弗氏完全佐剂,将二者充分研磨混匀, 并加入硫酸庆大霉素 10U/ 只。对除空白组外所有大鼠进行双侧腹股沟处多点皮下注射, 每只大鼠注射原量为 ml,2 周后用精子膜抗原加等体积不完全佐剂, 对除空白组外所有大鼠进行双侧腹股沟处多点皮下注射, 进行加强免疫每只大鼠注射抗原剂量同上次。 1 周后,用精子膜抗原再次双侧腹股沟处皮下多点注射。空白组大鼠于相应时间于相同位置多点注射等体积生理盐水。 分组及给药方法将所有雌性大鼠随机分为 6组, 每组 12只。中药低剂量组( 内障丸 g· kg-1 · d-1 ), 中药高剂量组( 内障丸 g· kg-1 · d-1 ) ,中药对照组(六味地黄