外治法对实验性兔膝骨性关节炎滑膜中bFGF表达的影响.doc

外治法对实验性兔膝骨性关节炎滑膜中bFGF表达的影响
　　摘要：目的：理解外治法对碱性成纤维细胞生长因子〔bFGF〕在实验性兔膝骨性关节炎滑膜中的表达分布情况的影响，讨论中医外治法治疗骨性关节炎的机理。方法：32只实验动物随机分为正常组、条件下操作，用手指触及腹股沟股动脉搏动处并以此为中心，做2纵行切口，切开皮肤、皮下组织，暴露股神经血管束，别离股静脉并进展双重结扎，在两道结扎线间将股静脉剪断，缝合皮肤及皮下组织。术后每天肌注青霉素20万U/只，共7d，以预防感染。
　　
　　32只白兔随机分为正常组、模型组、扶他林组和外治法组，每组8只。正常组不做任何特殊处理。模型组造模成功后正常喂养，自由活动。扶他林组用扶他林乳胶剂在患膝周围涂抹均匀，轻揉3~5in。外治法组那么用中药熏蒸配合手法弹拨以及电刺激，每次熏蒸30in，手法弹拨20in，以膝关节周围及股后侧及小腿后侧肌肉为主，配合伸膝关节。电刺激采用G6805-1型针灸治疗仪，配用自制电极，主要刺激兔股前侧及小腿后侧肌肉及膝周穴位，引起兔患膝被动屈伸达40°～50°为宜，主要以屈曲为主。以上两组均造模成功、自由喂养8周后分别开场治疗。治疗4周后处死动物取标本，标本取出后用10%多聚甲醛固定，行石蜡切片。模型组和正常组均在相应时间处死，取标本做石蜡切片。
　　
　　石蜡切片常规脱蜡，3%的双氧水室温5～10in灭活内源性酶。抗原热修复。滴加5%BSA封闭液，20in(室温下)。参加稀释的bFGF一抗，1h(37℃)。参加生物素标记的羊抗兔二抗，链霉亲合素生物素过氧化酶溶液与DAB液，室温显色，镜下控制反响时间。苏木素复染封片观察。其间每个步骤均用PBS冲洗5in3次。结果断定：在400倍高倍镜下观察细胞内外有无染色，未着色为阴性，浅棕黄色为弱阳性，中等棕黄色为阳性，深棕黄色为强阳性。
　　
　　实验数据以平均值±标准差(±ｓ)表示，组间差异比拟采用q检验，。
　　3结果
　　正常组免疫组化染色为阴性；模型组仅有部分细胞因子反响阳性，部分为弱阳性，胞浆中有黄褐色的斑块状阳性物质分布，但量较少，大部分细胞无着色，外治法组和扶他林组与正常组相比有所不同，胞浆中阳性物质数量增多，阳性细胞增加。在400倍光镜下每组选取10个典型视野，采用同济医科大学免疫组化实验室HIAS-2000型全自动医学彩***像分析系统进展分析。详细结果见表1。
　　表1各组bFGF平均光度均值的比拟(略)
　　注:与外治法组比拟*P＜，**P＜
　　4讨论
　　bFGF最早由牛的脑垂体中提取，是由146个氨基酸组成的活性物质，它对中胚层来源的细胞有明显的促有丝分裂作用[4]。它的生物学功能有以下几个方面：促进新生血管形成;促进软组织损伤修复;促进骨、软骨组织损伤修复。现已证实在人体和动物实验中bFGF关节内注射对软骨细胞的再生修复有很好的促进作用[5]。实验研究说明bFGF对体外培养的兔软骨细胞促进胶原合成和维持软骨细胞表型有重要作用[6]。并认为可能与以下作用有关：增加细胞集合生长时细胞的量；增加软骨细胞蛋白多糖和胶原合成，可使高分子蛋白多糖和Ⅱ型胶原含量增高；可阻滞软骨细胞的分化；可使衰老或退变的软骨细胞