补体溶血实验.ppt

关于补体溶血实验
第1页，讲稿共21张，创作于星期三
补体溶血实验
补体：一组存在于人和脊椎动物血清中及组织液中具有酶样活性，不耐热和功能上连续反应的糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，在正常情况下，血清中的补体大多以关于补体溶血实验
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补体溶血实验
补体：一组存在于人和脊椎动物血清中及组织液中具有酶样活性，不耐热和功能上连续反应的糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，在正常情况下，血清中的补体大多以无活性酶前体形式存在。
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物理性质：不稳定，易受各种理化因素的影响，加热，紫外线照射，机械震荡，酸碱和酒精等因素均可破坏补体。
灭活：56℃加热30min即可灭活
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补体系统的生物学功能
（1）溶菌和溶细胞作用：补体系统激活后，在靶细胞表面形成MAC，从而导致靶细胞溶解。
（2）调理作用：补体激活过程中产生的C3b、C4b、iC3b都是重要的调理素，可结合中性粒细胞或巨噬细胞表面相应受体，因此，在微生物细胞表面发生的补体激活，可促进微生物与吞噬细胞的结合，并被吞噬及杀伤。
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（3）引起炎症反应：在补体活化过程中产生的炎症介质C3a、C4a、C5a。它们又称为过敏***，与相应细胞表面的受体结合，激发细胞脱颗粒，释放组***之类的血管活性物质，从而增强血管的通透性并刺激内脏平滑肌收缩。C5a还是一种有效的中性粒细胞趋化因子。
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（4）清除免疫复合物：机制为：①补体与Ig的结合在空间上干扰Fc段之间的作用，抑制新的IC形成或使已形成的IC解离。②循环IC可激活补体，产生的C3b与抗体共价结合。IC借助C3b与表达CR1和CR3的细胞结合而被肝细胞清除。
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（5）免疫调节作用：①C3可参与捕捉固定抗原，使抗原易被APC处理与递呈。②补体可与免疫细胞相互作用，调节细胞的增殖与分化。③参与调节多种免疫细胞的功能。
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补体激活的途径：
经典途径
旁路途径
MBL途径
相同点：三条途径有共同的末端通路，即形成膜攻击复合物溶解细胞。
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1、补体经典途径(classical pathway)：是指以抗原抗体复合物为主要刺激物，使补体固有成分以C1、C4、C2、C3、C5～C9顺序发生酶促连锁反应，产生一系列生物学效应和最终发生细胞溶解作用的补体活化途径。
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2、替代途径（旁路途径）:是指不经C1、C4、C2活化，而是在B因子、D因子和P因子参与下，直接由C3b与激活物结合启动补体酶促连锁反应，产生一系列生物学效应和最终发生细胞溶解作用的补体活化途径。在感染早期可为机体提供有效的防御机制。其激活物是病原微生物等提供接触表面
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3、MBL途径：在感染早期，体内分泌甘露聚糖结合凝集素(MBL)和C反应蛋白。MBL与细菌表面的甘露糖残基结合，然后与丝氨酸蛋白酶结合形成MASP（MBL相关的丝氨酸蛋白酶），MASP继而水解C4和C2启动后序的酶促连锁反应，产生一系列生物学效应和最终发生细胞溶解作用的补体活化途径。激活物（或激活剂）是炎症期产生的蛋白和病原体。
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三条途径的区别见下表
区别点
经典途径
旁路途径
MBL途径
激活物
IgG1～3或IgM
与Ag复合物
脂多糖、酵母多糖、
凝聚的IgA和IgG4
MBL
（甘露聚糖结合凝集素 ）
参与成分
C1～C9
C3，C5～C9， B、
P、D因子
同经典途径
C3转化酶
C4b2b
C3bBb
同经典途径
C3转化酶
C4b2b3b
C3bnBb
同经典途径
所需离子
Ca2＋ Mg2＋
Mg2＋
同经典途径
作用
参与特异性免疫在感染后期发作用
参与非特性免疫，在
感染后期发挥作用
同经典途径
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补体的来源、采集
实验室常用豚鼠、兔的新鲜血清作为补体的来源。
补体的采集：一般选用3-5只健康未妊娠的豚鼠或兔子，以无菌操作采集血液，采集好的血液置4℃冰箱过夜，次日离心分离血清即可分离到补体。
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溶血素（抗绵羊红细胞抗体）：是以SRBC作为抗原免疫家兔所得到的兔抗血清，无需进一步提纯，但试验前应先56℃加热30min或者60 ℃3min灭活补体。
溶血反应：由于抗原（红血球）和抗体（溶血素）进