GAPDH内参抗体.docx

GAPDH抗体推荐—高性价比GAPDH内参抗体的选择
在Western Bloting实验中,可能存在总蛋白浓度测定不准确,或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差;这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参,比如内参GAPDH的含量来进行校正。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。 GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。
如何选择合适的GAPDH抗体?
内参抗体虽然选择较多,但是也需要遵循一定的原则,并契合实际的应用要求。首先,我们需要考虑目的蛋白的大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上,因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参,由于GAPDH的检测分子量大约在36kD,因此该内参抗体不是很适合用于检测30kD-40kD大小目标蛋白的WB实验中。另外,不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参。
因为检测的目的蛋白分子量在50kD左右,之前的β-Tubulin不是很适合,就购买了一支Abbkine的GAPDH抗体做内参,效价确实有点惊讶,我用1:1000倍起始稀释觉得条带很浓,后来一直到1:8000稀释,同时减少了曝光时间,条带仍然很清晰。——武汉大学生命科学院一客户
产品名称及描述
品牌
货号
产品说明
Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5)
Abbkine
A01020
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HRP Conjugated Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5)
Abbkine
A01025
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一般来说,内参抗体可检测的种属类型越多,在使用过程中的选择余地就越大;而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。另外,抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面,也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl GAPDH抗体(假如其WB检测的稀释比率是1:5000,最终使用液相当于500ml),要比效价低的1ml的GAPDH抗体(假如 WB检测的稀释比率是 1:200,最终使用液相当于2ml)性价比更高。因此在选择抗体的时候,不但需要考虑抗体的量,还需要考虑抗体的效价,即不同应用的建议稀释比率。
为什么选择推荐Abbkine品牌的GAPDH抗体?
供应GAPDH抗体的进口品牌有很多,像Abcam、Santa Cruz、Cell Signaling(CST)、Millipore等都有相关GAPDH抗体提供。但是由于不是专门的标签和内参抗体供应商,因此在性价比上不是最优的选择, 以Abcam为例,其一支100μl GAPDH抗体的RMB报价为￥4418;CST的一支100μl GAPDH抗体的报价是￥2997。
 
另外,一些国内的供货商也能提供分装的GAPDH抗体,但是在品牌和质量保障上都有不足。国产分装的GAPDH体在质量稳定性上有不足,并且经过分装以后,其效价也有损失。而原产于国内实验室的GAPDH抗体有些具有较好的检测活性