第八节高效液相色谱.ppt

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二、高效液相色谱原理
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。
150-350*105Pa
高效:大于30000塔板/米
10-9g(紫外检测)、10-11g(荧光检测)
第八节高效液相色谱
三、HPLC的特点
HPLC在高压下使液体通过色谱柱,在室温条件下分离混合组分,经检测器转变成电信号,由记录器描记或数据处理装置显示测定结果,具有高压、高速、高效、高灵敏度等特点。
:由于HPLC是以液体作为流动相,而液体比气体通过色谱柱时所受的阻力要大得多,所以必须施加高压,一般为15-30MPa,最高可达50MPa。
:由于HPLC采用了高压,使流动相液体的流速加快,一般分析周期为数分钟至数10分钟,比经典的液相柱色谱要快得多,但比GC稍慢。
第八节高效液相色谱
:由于HPLC的柱效较高(每米塔板数可达5000),有时一根柱子可分离数十种乃至上百种组分。
:采用灵敏的检测器和自动化装置,可检出10-9g乃至10-11g的物质;所需试样量很少,通常只需数十微升试样即可进行全分析。
由于HPLC具有以上特点,所以70年代以来得到了迅速的发展。一般认为,对于有机物的色谱分析,当其相对分子质量小、沸点较低时,可用GC进行分析;当沸点较高(>450℃)、不能气化或热稳定性差者,可用HPLC分析;如果条件不允许,无法购置昂贵的仪器时,可用TLC等经典液相色谱进行分析。
第八节高效液相色谱
高效液相色谱系统
第八节高效液相色谱
第八节高效液相色谱
液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph
第八节高效液相色谱
液相色谱仪(2)
第八节高效液相色谱
液相色谱仪(3)
第八节高效液相色谱
四、HPLC的分类
HPLC可以分为很多类别,按分离机制可分以下几种主要类型。

以吸附剂为固定相,以不同极性的溶剂为流动相,根据试样中各组分吸附能力的不同而进行分离的方法,称液相吸附色谱。在HPLC中常用全多孔型硅胶微粒为吸附剂,直径5-10μm,由于颗粒小且多孔,故柱效很高。
-液分配色谱
流动相与固定相均为液体的色谱法,称液-液分配色谱法或简称液-液色谱法,按照固定相和流动相极性的差别,可分为正相与反相色谱法两类。
第八节高效液相色谱