中国药典2010年版微生物限度检查及发展趋势-马仕洪.ppt

中国药典2010年版微生物限度检查及发展趋势
中国药品生物制品检定所
马仕洪
2010年5月26日上海
web site:-mail:******@.cn tel:010-67095509
地址:北京市天坛西里2号邮编:100050
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无菌/微生物限度检查理念
环境保证
培养基保证
无菌性检查
灵敏度检查
有效的方法
方法验证
SOP操作
有效的结果
可靠的结论
结果判断
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中国药品生物制品检定所
微生物限度检查现状与发展趋势
1、方法和标准的修订与完善
2、技术现状与标准化
3、微生物限度检查的几个问题
4、微生物限度检查法应用指导原则
5、抑菌效力检查法指导原则
6、药品微生物检验替代方法验证指导原则
7、药品微生物实验室规范指导原则
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中国药品生物制品检定所
1、方法和标准的修订与完善
表8 中国药典2005版微生物限度检查法与英美药典比较
比较项目
ChP2005
USP29
BP2002
检验条件规定
总体10000级、局部100级
无具体规定
无具体规定
计数测定方法
平皿法、薄膜过滤法、MPN
平皿法、MPN
平皿法、薄膜过滤法、MPN
控制
大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌(10)、铜绿假单胞菌、金葡球菌、梭菌、其他致病菌
大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、金葡球菌、大肠菌群、肠道菌、肠杆菌科
大肠埃希菌、沙门菌(10)、铜绿假单胞菌、金葡球菌;肠杆菌科及某些革兰阴性菌
稀释液
***化钠-蛋白胨缓冲液;;%NaCl
;大豆酪蛋白消化培养基/乳糖肉汤培养基
***化钠-蛋白胨缓冲液;乳糖肉汤/其他培养基
培养条件与时间
细菌数:营养琼脂,48hrs
霉菌及酵母:玫瑰红钠琼脂,72hrs,5~7天
需气菌总数:大豆酪蛋白消化物琼脂,48~72hrs
霉菌及酵母:沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂,5~7天
需气菌总数:大豆酪蛋白消化物琼脂,5天
霉菌及酵母:含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂、大豆酪蛋白消化物琼脂,5天
控制菌检查结果判断与复试规定
一次检出为准
不符合标准规定,取大于25g的样品复试
一次检出为准
计数结果判断与复试规定
第一次结果超过规定标准,复试两次,三次结果平均报告
不符合标准规定,取大于25g的样品复试
测定结果在规定的限度标准5倍以内均为合格
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中国药品生物制品检定所
样品10g或10ml+缓冲液至100ml
总需氧菌TSA,
35℃,48-72h
真菌SDA(PDA),
20-25℃,5-7d
结果(cfu/ml or g)
取1ml样品液
图14 USP、BP总需气菌/霉菌及酵母菌计数流程
总需气菌、霉菌及酵母菌计数
中国药典: 玫瑰红钠琼脂, 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂
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中国药品生物制品检定所
对供试品的前处理和一些检验方法进行了完善;
具有明显的中国特色,与国际差距显著。
计数测定体系的差异:
难以操作,检验繁琐
需气菌总数=细菌数+霉菌及酵母菌?
1000 1000 100
参见:《美英欧药典微生物限度标准的浅析》,苏德模、胡昌勤、马越,《中国药品标准》,2005年第3期
1、方法和标准的修订与完善
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中国药品生物制品检定所
Harmonization(USP/EP/JP):Microbiological Examination of Nonsterile Products
The USP and the EP Microbial Limits Tests are in the final stages of were signed off to Stage6A at the November,2005 meeting of the PDG held in Chicago,IL USA (USP 2006a).
Stage6A:REGIONAL ADOPTION

USP31 General Information/<1196> Phmarmacopeial Harmonization: The following policy statement was approved by the PDG at its September 2002 meeting.
Table2. Status of Harmonization-General Chapters
Tests for specified anisms EP Stage4
Microbial Enumeration EP Stage4
Microbial Attribut