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氨基葡萄糖的检测方法汇总
氨基葡萄糖的检测
葡萄糖的一个羟基被一个氨基取代的化合物。分子式C6H13O5N,俗称氨基糖,简称氨糖。又名葡萄糖***,广泛存在于自然界;市面上氨糖主要分为盐酸氨糖与硫酸氨糖两种。目前,氨糖的分析方法主要有分光光度法、HPLC和HPIC等,最常用的分析方法为高效液相色谱法,近年来离子色谱技术在糖类化合物分析中的应用也越来越广泛。
分光光度法
(《中国药典》2010 年版二部附录IVA)测定。
1 对照品溶液的制备:精密称取经105干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量,加水溶解制成每1ml约含25μ的溶液作为对照品溶液。
2 供试品溶液的制备:精密称取样品约25mg,置100ml 量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取10ml,置100ml 量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,既得。
3 测定法:分别取对照品溶液及供试品溶液各 5ml 分别置具塞试管中,另取具塞试管蒸馏水5ml作为空白,各加乙酰***试液(取乙酰***2ml, 碳酸钠溶液至50ml,,摇匀,置沸水浴中(1分钟后密塞),准确加热25 分钟,取出,用冰水迅速冷却后, ,60水浴中保温10 分钟后,再加对二甲氨基苯甲醛试液(, 加无醛乙醇15ml 及盐酸15ml,摇匀),强力振摇,并继续在 60水浴中保温1 小时,立即用冷水冷却至室温。
参照分光光度法(《中国药典》2010 年版二部附录IVA)在525nm 波长处分别测定吸光度,计算,既得。
HPLC-ELSD法(高效液相色谱法) 依据:GB/T20365-2006
1、主要使用仪器
高效液相色谱仪, ELSD蒸发光散射检测器,色谱柱
2、标准溶液的配制
。分别加1mL乙***,超声1min后,加纯水定容至10mL。吸取上述硫酸软骨素和氨基葡萄糖标准溶液各
、、、、,分别合并于5个10mL容量瓶中,并加入1:9的乙***溶液定容,、、、、。
3、样品处理
,加入5mL乙***,超声分散1min。加纯水定容至50mL,摇匀,超声15min×2,静置,取上清液5mL,加入1:9乙***溶液定容至25mL,摇匀,待用。
4、样品测定:取10uL标准溶液及样品提取液,注入高效液相色谱仪,以保留时间定性,吸收峰高或峰面积与标准比较定量。
5、计算结果
m
式中:
X—样品中硫酸软骨素或氨基葡萄糖的含量,g/100g
h—样品对应峰高取对数
hs—标准对应峰高取对数
ρ—标准对应浓度取对数,mg/mL
m—样品质量,g
HPIC-PAD法(离子色谱法)
主要仪器:
离子色谱仪(Dionex):电化学检测器,Au工作电极,Ti对电极,pH/ Ag/ AgCl复合参比电极,糖类分析柱。
硫酸氨基葡萄糖和盐酸氨基