生化(一)实验讲义(生物技术).doc

实验一、血红蛋白吸收光谱的测定
溶血液的制备
擒拿固定小白鼠,用手术镊摘除其一只眼球,取眼底血2滴于10ml蒸馏水()中,混匀。
吸光度测定与A-λ曲线的绘制
取两只比色皿,分别装入蒸馏水、溶血液,在波长(λ)520nm~600nm的范围内,,用分光光度计测溶血液吸光度A值,再在坐标纸上绘制A-λ曲线,并找出λmax值。
λ 520 525 530 535 537 539 541 543
A
λ 545 550 555 560 565 568 570 572
A
λ 574 576 578 580 585 590 595 600
A
▲注意事项:
:远离吸收峰时,间隔5nm;靠近吸收峰时,间隔2nm。
~0. 8之间与溶血液的浓度线性较好。
、577nm、404nm、280nm及210nm处有峰值;还原血红蛋白在波长555nm处有峰值。本次实验对象为氧合血红蛋白。
-λ曲线中描出λmax1、λmax2,并写出具体波长值。
三、结果及结果分析
实验二、蛋白质性质实验
一、等电点(pI)测定
1、操作及结果
1号管
(pH=)
2号管
(pH=)
3号管
(pH=)
4号管
(pH=)
5号管
(pH=)


—
—
—
—

—



—
1mol/L醋酸
—
—
—
—

(ml)





混匀,,混匀,静置,观察浑浊度。
10min后的浑浊度
30min后的浑浊度
2、注意事项:
(1)观察颜色、浊度采用白色背景。
(2)pH≈pI时,试管中底部沉淀最多,上端较清亮。
3、结论
二、茚三***反应
1、操作及结果
1号管
2号管
5%鸡蛋白溶液(滴)
5
—
(滴)
—
5
%茚三***(滴)
2
2
摇匀,微火加热煮沸1~2分钟,冷却后,观察结果。
结果
2、注意事项:
加热用外焰;防局部高温;防爆沸。
3、结论
实验三、血清总蛋白测定
:双缩脲反应
:用对比法测定。
空白管(B)
标准管(S)
测定管(T)

50μl
—
—
TP标准液()
—
50μl
—
血清
—
—
50μl
双缩脲试剂



混匀,室温30min后,540nm以空白管调零,测定标准管、测定管吸光度AS、AT
:血清TP含量(g/L)=(AT/AS)CS,其中CS =70g/L
4.***血清参考范围:60~80g/L
实验四、血清白蛋白测定
:溴甲酚绿法(BCG法)

BCG + Alb 草绿色复合物
黄色 pI= λmax=630nm
:用对比法测定。
设置试剂空白、标准对照(CS=),按样品与试剂比=10μl∶2ml加样,室温10min,630nm测AS