人教版选修3
专题1 基因工程
课题2 基因工程的基本操作程序
1、目的基因的获取
2、基因表达载体的构建
3、将目的基因导入受体细胞
4、目的基因的检测与鉴定
基因工程基本操作的四个步骤
一、目的基因的获取
(一)、目的基因主要是______________________
编码蛋白质的结构基因
如:苏云金杆菌的抗虫基因、人胰岛素基因等
(二)、获取目的基因的常用方法有哪些?
1、从基因文库中获取
2、利用PCR技术扩增
3、人工合成
请阅读P9第一和二两段
一、目的基因的获取
(一)从基因文库中直接获取
:概念见P9
:按外源DN***段的来源分类
种类
基因组DNA文库:含有一种生物的全部基因
部分基因文库:只包含了一种生物的部分基因,
如:cDNA文库
:
见课本P9
某生物体内全部DNA
许多DN***段
受体菌群体
限制酶
与运载体连接导入
基因组文库
某种生物某个时期的mRNA
cDNA
反转录
受体菌群体
与运载体连接导入
部分基因文库
(cDNA文库)
①概念:PCR全称为_______________,是一项
在生物____复制___________的核酸合成技术
③条件:_________________________、
______________ 、___________ 、
_______________________
②原理:__________
④方式:以_____方式扩增,即____(n为扩增循环的次数)
⑤结果:
多聚酶链式反应
体外
特定DN***段
DNA复制
已知基因的核苷酸序列(模板)
四种脱氧核苷酸
一对引物
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)
指数
2n
使目的基因的片段在短时间内大量扩增
(二)利用PCR技术扩增目的基因
⑥过程:
a、DNA变性(90℃-95℃):双链DNA模板
在加热作用下,_____断裂,形成___________
b、退火(冷却至55℃-60℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部________。
c、延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下,从
引物处延伸,合成与模板互补的________。
氢键
单链DNA
双链
DNA链
(二)利用PCR技术扩增目的基因
PCR技术扩增与DNA复制的比较
PCR技术
DNA复制
相同点
原理
原料
条件
不同点
解旋方式
场所
酶
结果
碱基互补配对
四种脱氧核苷酸
模板、能量、酶
DNA在高温下变性解旋
解旋酶催化
体外复制
细胞核内
热稳定的DNA聚合酶
细胞内的DNA聚合酶
大量的DN***段
形成整个DNA分子
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