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仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞增殖和ALP影响的实验研究
  作者:吴剑静王靖吴云刚沈权
【摘要】 [目的]观察仙鹿健骨汤含药血肜清对大鼠成骨细胞增殖和成骨细胞ALP的影响。[方聱法]取12周龄Wiste掀r大鼠40只,随机分为A送、B、C、D、E、F六组婵,每组8只,分为仙鹿健骨醪汤低、中、高剂量组(A、封B、C组),阳性对照组(懔D组)、模型组(E组)及┭空白对照组(F组),制备痴成仙鹿健骨汤含药血清备用酬。成骨细胞建立采用新生S雹D乳鼠5只(24h内颅盖悄骨)进行体外细胞传代培养。观察仙鹿健骨汤含药血清瞅对体外培养的新生SD大鼠虔成骨细胞增殖、分化情况。塌[结果]B、C、D、F组麒间比较无显著性差异,与E组比较细胞增殖分化与AL嘻P影响具有显著性差异(P波【关键词】 骨质疏松症仙察鹿健骨汤成骨细胞碱性磷酸酶大鼠
为了探索骨质疏松防治效果,我们对自主开发雍的中药制剂仙鹿健骨汤进行菥了临床和实验的系列研究,纹通过本实验来观察利用仙鹿葱健骨汤含药血清对体外培养成骨细胞的增殖及其ALP聚的影响。
1 材料与方法讼
 实验动物 12周龄的嗖雌性Wistar大鼠48痊只,体重为200±20g
坑,新生大鼠4只,由浙江中医药大学实验动物中心提供尕。
 实验药品 仙鹿健骨沧汤:仙灵脾、鹿角胶、骨碎仟补、杜仲、黄芪、白术、丹曩参、当归。药物煎剂由温州婆医学院附属第一医院中药房暾提供,水煎浓缩后含分别含蚝生药/ml、1g/ml、僵2g/ml。αD3:以颚色列梯瓦制药工业有限公司略生产,批号卫药准字J1浈0号,水溶液浓度为μg/恶ml。氯氨酮:上海第一生角化药业有限公司生产,批号莰国药准字H3102189茫7。
 实验方法
 去势⊥大鼠造模 取12周龄的雌性Wistar大鼠48只盱,体重约200g,取其中た40只,腹腔注射戍巴比妥尹钠麻醉条件下,打开大鼠腹启腔去除双侧卵巢,逐层缝合撂,随机分成5组。其余大鼠氦8只为空白组,共6组,每替组8只:仙鹿健骨汤高、中牲、低剂量组、αD3对照佯组、模型组、空白组。
 血清制备 各组每天均以1嘹0ml/kg,分别结予仙嵝鹿健骨汤水提液、αD3航水溶液及生理盐水灌胃,1辙次/d,连续10d,动物腽处死前1h再灌胃1次,动物给予氯氨酮麻醉,右心室抽血,采集到的血液,4℃钼静置4h,3000r/m溱in离心30min,收集血清,56℃水溶灭活补体论。-20℃保存,血清保存蝙时间不超过3周。使用前用藩培养基稀释,过滤膜除菌。
 新生大鼠颅骨成骨细胞制歆备及培养 取新生大鼠,无ド菌取颅骨,剔除黏附的结缔擀组织和血管,剪碎约1×1滕mm3,加含%的Ⅰ型胶原酶和%的透明质酸酶的消化萱酶消化,消化5个循环,每次20min,其间不时摇动,取3、4、5次消化的绋细胞悬液,1000r/m苻in离心10min弃上清索,沉淀的细胞用10%胎牛耆血清DMEM培养液重悬,堑吹打均匀后,接种到培养瓶瑕中,培养瓶置于37℃,5彳%CO2孵箱孵育,24h贺换液,待细胞60%~70鹫%贴壁后,%胰酶消化,本麝实验所用细胞均为原代培养悠。
 不同稀释比的血清对ㄔ成骨细胞增殖的影响 按细┦胞密度1×105个/ml岱加入96孔板,每孔100μl,24h后换5%FC丢SDMEM培养基,每孔厥90μl。Ⅰ~Ⅵ组同