天然产物分析实验报告.doc

天然产物活性成分
检测实验报告
姓名:李雪怡
学号:20**********
年级班级:12生物制药(1)班
实验一:茶叶中茶多酚的粗提取与含量测定
一、实验目的:
1、了解并熟悉茶多酚的元素组成、结构构成、理化性质。
2、掌握溶剂萃取法粗提取茶多酚的原理与操作。
3、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。
4、了解分光光度计的使用方法和注意事项。
二、实验原理和应用:
茶多酚(Tea Polyphenols)是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色苷类、黄***类、黄***醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质(儿茶素)最为重要。茶多酚又称茶鞣或茶单宁,是形成茶叶色香味的主要成份之一,也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。研究表明,茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用,能有效地阻止放射性物质侵入骨髓,并可使锶90和钴60迅速排出体外,被健康及医学界誉为“辐射克星”。
目前国内外茶多酚粗品的提取的方法主要有:溶剂萃取法、离子沉淀法、树脂吸附分离法、超临界流体萃取法、超声波浸提方法、微波浸提法等等。在这些提取茶多酚的方法中,每种方法都有它各自的针对性和使用范围,使用时要根据各自的情况而定。根据实验室的条件及实验要求,本实验采用溶剂萃取法对干茶叶中的茶多酚进行粗提取,即利用茶多酚易溶于乙酸乙酯等有机溶剂的原理进行液-液萃取。
茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法,由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂,且靠肉眼观察颜色判断终点,如果样品溶液颜色较深时,可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物,络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。
三、实验仪器、材料和试剂
实验仪器:
分光光度计、干燥箱、电子天平、pH计、真空泵、纱布、漏斗、旋转蒸发仪、250ml 容量瓶、50ml 容量瓶、分液漏斗
实验材料:
干茶叶(市售散装茶即可)
实验试剂:
硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) ,酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O) ,磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) ,磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O) ,乙酸乙酯。
四、实验操作
1、溶液的配制
酒石酸亚铁溶液制备: g ()硫酸亚铁, g酒石酸钾钠(),用水溶解并定容至250 ml(低温保存,有效期10天)。
2、干茶叶的预处理
将干茶叶洗净、晾干,烘干,最后粉碎。粉碎的目的是与液体的接触面增大使提取率增高。由于试验条件的限制,用剪刀代替粉碎机将干茶叶剪碎,并且用研钵研细,干茶叶量为50. 00g。
3、茶多酚的粗提取与定性检测
称取经过预处理的干茶叶末30. 00g,加入250mL 90℃接近沸水中搅拌浸提、过滤,先后用 250mL的乙酸乙酯萃取两次。合并两次有机相。减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂得黄色粉末状茶多酚。从外观上看,为黄色粉末状。物理性能为,易溶于水及乙醇,味苦涩。
图 1 高浓度茶多酚样品(98%)
4、茶多酚溶液的配置与含量的测定
,加水溶解定容至 250mL,混匀,即为每毫升含 1mg步骤3中