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PEDV胶体金试纸条制备
胶体金(colloidal gold)是由***金酸(HAuCl4)在还原剂等作用下,聚合成特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,利用它在碱性环境下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团相互吸引而形成牢固结合,可以将胶体金与抗体蛋白以及其他一些蛋白相结合,进行示踪研究。目前已成为继荧光素、放射性同位素和酶之后,在免疫标记技术中较为常用的一种非放射性示踪剂。1971年,Faulk和Taylor首先报道了将胶体金与抗体结合,应用于电镜水平的免疫细胞化学研究。1974年,Romano等用胶体金标记抗球蛋白抗体,建立间接免疫金染色法。之后,胶体金作为以后总新型免疫标记技术发展很快。1978年,Geohegan等将胶体金标记抗体用于普通光镜下检测B淋巴细胞表面膜免疫球蛋白,建立了光镜水平的免疫金染色(immunogold staining,IGS),但是所需的胶体金颗粒必须大于20nm,并且标记物浓度要高,才能获得阳性结果。1981年Danscher等用银显影方法增强了金颗粒的可见度,并提高了灵敏度。1983年Holgate等将免疫金染色与银显影技术相结合,称之为免疫金银染色法(immunogold silver staining,IGSS)。由于IGS和IGSS两种方法具有试剂制备简便,特异性强、灵敏度高、应用范围广,并可以用于双重和多重标记等特点,被广泛应用于医学和细胞生物学研究领域,是目前免疫组织化学技术中常用的敏感方法之一。
近年来胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金/银染色(dot IGS/IGSS)以及斑点金免疫渗滤测定法(dot immunogold filtration assay,DIGFA)等多种标记免疫检测方法。,用于与制备纯化的抗体相结合,为制备检测·猪流行性下痢(PEDv)病毒试纸条做准备。猪流行性下痢(PEDv),自2013年5月在爱荷华州出现以来,每周夺去10万头猪崽和小猪的生命。这种病毒不仅给全美养猪业造成灾难,环保专家更担心死猪尸体会污染地下水。美国农业部估计,%,即从2013年同期的5200万头下降到5000万头。生猪产量下降已经将2014年5月火腿和猪肉等相关产品的售价抬高12%;其中火腿价格比2013年同期上升15%,猪排上升近13%。全国猪肉理事会科技副主席孙德波格说,"我从1981年就当兽医,从来没有见过类似先例。它是灾难性的病毒。"由于死猪数量太大,环境专家担心各州要求掩埋死猪的法律所产生的后果,尤其是地下水可能遭污染。美国保水联盟资深律师福斯特说,我们知道这种病造成很高的死亡率,我们看到掩埋死猪之后浅层地下水受影响,而很多人都是饮用浅层地下水。为了控制本病的流行,建立一种科学、快速、准确的检测和诊断方法是非常必要的。本研究旨在研制一种用于检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条以解决上述难题。
材料
酪蛋白,***纤维素膜、滤器和滤膜, 玻璃纤维素膜、吸水垫、不干胶、PVC垫板(购自上海金标生物技术有限公司)、2%BSA、%蔗糖、l%吐温20、% PVPk30、 % mo