新疆穴居狼蛛毒素分子多样性和功能探究.pdf

湖南师范大学
博士学位论文
新疆穴居狼蛛***分子多样性和功能研究
姓名:张勇群
申请学位级别:博士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:梁宋平
20091201
中文摘要新疆穴居狼蛛是在我国新疆发现的一种有毒蜘蛛。它的毒液由许多具有不同生物活性物质组成。为了更好地开发利用该生物资源,阐明新疆穴居狼***分子多样性及其遗传进化机制是非常重要的。我们取新疆穴居狼蛛的毒腺建立��文库,随机挑取单克隆进行测序,得至���龈咧柿康谋泶镄蛄斜昵�U庑┍泶镄蛄斜昵┤ト哂嗪螅��至���鑫ㄒ恍蛄校�渲邪���个单拷贝序列和�个多拷贝重叠序列。其中,蜘蛛***基因有��觯����鲎搴��个单一序列,占整个转录组的�.�ィ挥胪ǔO赴�鞍子泄氐幕���觯����鲋�叠群和�个单一序列,占整个转录组的�.�ァA硗饣褂���%没有匹配到与数据相似的序列或者相似性非常低。序列提交至�������列收录号为����.����和����.����。在所得的新疆穴居狼蛛毒腺��文库中,共获得��龆舅囟嚯模�ト哂嗪罂傻���跞ǔさ亩舅厍疤�含有信号肽,富含酸性氨基酸残基的中间肽和成熟肽�=�涤邢嗤�装彼峥蚣芮曳岫茸罡叩男蛄泄槲R焕啵��他归为第二类,分别用����构建进化树。结果显示,根据预测的成熟肽的半胱氨酸的排列方式文库中的***前体可以分为六个超家族,分别为超家族�琁�琁�,Ⅳ,�廷觥A硪环矫妫�云胀ㄏ赴��白相关的转录子进行的基因注释揭示了一些新的可能的***成分和毒囊重要细胞生理过程的相关成分,比如蛋白翻译后修饰,细胞运动,蛋白质合成,能量供应等等。新疆穴居狼蛛毒腺的转录组分析和基因
肿瘤作用,能抑制��细胞的增殖,其��剂量为�州。关键词:新疆穴居狼蛛,��文库,表达序列标签�����的注释展示了毒腺这个特化的产毒器官中的生理概况。蜘蛛粗毒中富含生物活性物质,尤其以多肽类成分为主。�谛�疆穴居狼蛛粗毒中我们分离鉴定了一种新的细胞裂解肽,命名为�����浞肿恿课������,含有�个氨基酸残基,且羧基端残基酰***化。文中我们研究了��.�的细胞裂解作用,结果显示,在���浓度引起�%红细胞溶血。同时��.�具有抗随着环境的改变,蜘蛛的种类和数量越来越少,仅靠天然资源远不能满足对***的全面研究和开发利用的需要。采用表达质粒����痑在酿酒酵母��斜泶颒���的产率达到每升�.��NA颂教终飧霰泶锵低呈欠衲艹梢桓霰泶镏┲攵舅氐耐ㄓ�系统,我们克隆�个编码新疆穴居狼蛛***样多肽的基因。最后,成功的表达出�龊��对或�远�蚣�亩舅鼗�颉6哉庑┍泶�产物进行了初步的功能研究,遗憾的是还没有找到生物学活性。综上所述,利用分子生物学、生物信息学、生物化学、质谱和膜片钳等技术,我们对新疆穴居狼蛛毒腺的转录组进行了研究,分离鉴定了一种新的细胞裂解肽,克隆了一批新基因,成功表达了�个***多肽,为进一步研究***的功能打下了基础。毒,表达与纯化
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嗍��缛�学位论文作者签名:弓钫喀易彳日期:伽研年�以露呷�勿口�辏�,月衫日�⒈C芸冢�凇��杲饷芎笫视帽臼谌ㄊ椤�湖南师范大学学位论文原创性声明湖南师范大学学位论文版权使用授权书本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,,本论文不合任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担.\本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向国家