该【BLyS突变体的构建、表达、纯化和功能鉴定的中期报告 】是由【niuww】上传分享,文档一共【1】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【BLyS突变体的构建、表达、纯化和功能鉴定的中期报告 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。BLyS突变体的构建、表达、纯化和功能鉴定的中期报告BLyS(激活B淋巴细胞刺激因子)是一种细胞因子,对B淋巴细胞的生长、分化和存活都有影响。目前已知BLyS有三种受体,分别为TACI、BAFF-R和BCMA。本项目旨在构建BLyS突变体,通过对特定受体的亲和力增强或减弱,探究BLyS与受体之间的相互作用机制。在之前的工作中,我们制备了三种BLyS突变体:BLyS-Ig(增加与TACI和BAFF-R的亲和力)、BLyS-mut1(增加与TACI的亲和力)、BLyS-mut2(减少与BCMA的亲和力)。接下来,我们进行了表达和纯化实验,并初步进行了功能鉴定。首先,我们在CHO-S细胞上表达了这三种BLyS突变体,经过SDS-PAGE和Westernblot证实了其表达。然后,我们利用His-tag进行纯化,通过Ni-NTA柱和SephacrylS-200HR柱获得了高纯度的BLyS-Ig、BLyS-mut1和BLyS-mut2。接下来,我们进行了功能鉴定。首先,采用MTT法检测对B细胞的增殖作用,结果表明BLyS-Ig、BLyS-mut1和BLyS-mut2对B细胞的增殖能力均有明显影响,且BLyS-Ig对B细胞的增殖作用最强。然后,我们对BLyS突变体与其受体的结合亲和力进行了ELISA实验,结果表明BLyS-Ig对TACI和BAFF-R的亲和力均有明显增强,BLyS-mut1对TACI的亲和力也有增强,而BLyS-mut2对BCMA的亲和力有显著减弱。综上所述,我们成功地构建了三种BLyS突变体,并初步进行了表达、纯化和功能鉴定。下一步,我们将进一步探究BLyS构象、突变位点和受体结合的关系,深入研究其作用机制。
BLyS突变体的构建、表达、纯化和功能鉴定的中期报告 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.