C5aR稳定表达株的构建及其功能研究的中期报告.docx

该【C5aR稳定表达株的构建及其功能研究的中期报告 】是由【niuww】上传分享，文档一共【1】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【C5aR稳定表达株的构建及其功能研究的中期报告 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。C5aR稳定表达株的构建及其功能研究的中期报告为了研究C5aR的功能及其与其他受体的相互作用,我们构建了稳定表达C5aR的细胞株。在前期工作中,我们选择了人类表皮肺癌细胞系A549作为宿主细胞,将C5aR的编码序列克隆到表达载体pCDH中,并利用Lipofectamine3000将其转染至A549细胞中。转染后,利用筛选剂G418选出稳定表达C5aR的克隆细胞,并称之为A549-C5aR细胞。在中期报告中,我们进行了A549-C5aR细胞的鉴定及其功能研究。首先,我们通过Westernblot检测A549-C5aR细胞是否成功表达C5aR蛋白。结果显示,A549-C5aR细胞中存在明显的C5aR蛋白表达,而对照组A549细胞则没有表达C5aR蛋白。接着,我们评估了A549-C5aR细胞是否对C5a有反应。通过实时荧光定量PCR测定核因子κB(NF-κB)的基因表达及细胞酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平,发现C5a可以显著激活A549-C5aR细胞中的NF-κB及促进TNF-α的分泌,而对照组A549细胞则未见明显反应。这表明A549-C5aR细胞对C5a具有反应性,并能够在细胞水平上传递C5a的信号。进一步地,我们研究了A549-C5aR细胞的迁移能力。通过Transwell实验,发现与对照组相比,A549-C5aR细胞的迁移能力增强了约2倍,表明C5a的信号能够促进肺癌细胞的迁移和转移,进一步验证了C5aR在肿瘤发生和发展中的作用。综合以上结果,我们成功地构建了稳定表达C5aR的A549细胞株,并证明其对C5a有反应性,并且能够促进肺癌细胞的迁移。下一步,我们将继续研究C5aR在肺癌中的功能及其与其他受体的相互作用。