HCV丝氨酸蛋白酶活性监测体系的建立的中期报告.docx

该【HCV丝氨酸蛋白酶活性监测体系的建立的中期报告 】是由【niuww】上传分享，文档一共【1】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【HCV丝氨酸蛋白酶活性监测体系的建立的中期报告 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。HCV丝氨酸蛋白酶活性监测体系的建立的中期报告HCV丝氨酸蛋白酶是HCV病毒复制过程中的一个关键酶,因此成为HCV药物研发的一个重要靶点。本研究旨在建立一个适用于高通量筛选的HCV丝氨酸蛋白酶活性监测体系,为HCV药物研发提供支持。在建立活性监测体系的过程中,我们首先合成了HCV丝氨酸蛋白酶基因,并在大肠杆菌中进行重组表达。通过Ni2+亲和层析法纯化得到了纯化蛋白,经Westernblot验证为目标蛋白。接下来,我们确定了丝氨酸蛋白酶的最佳反应条件,包括最适pH,最适反应时间和最适反应温度。最佳反应条件下,丝氨酸蛋白酶的活性达到了峰值。同时,我们还评估了不同底物对丝氨酸蛋白酶的活性影响,并确定了最适底物。为了建立高通量筛选体系,我们利用FluorescenceResonanceEnergyTransfer(FRET)技术开发了一种新的底物。该底物可以发生FRET效应,使得底物被水解后释放的两种荧光簇之间的荧光共振能量转移,并产生荧光荧光共振信号。该体系具有较高的灵敏度和特异性,并可应用于高通量筛选。总的来说,我们成功地建立了一个适用于高通量筛选的HCV丝氨酸蛋白酶活性监测体系,该体系具有较高的灵敏度和特异性,为HCV药物研发提供了支持。