高基线肿瘤负荷相关的巨噬细胞通过IGFBP2-STAT3-PD-L1通路促进免疫抑制微环境的形成从而.pdf

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】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。:..癌症2023年第42卷第8期·409·DOI:-?原创论著?高基线肿瘤负荷相关的巨噬细胞通过IGFBP2-STAT3-PD-L1通路促进免疫抑制微环境的形成从而降低免疫检查点抑制剂的疗效译作已获得版权所有者许可温照伟1,#,孙慧颖1,#,张志华1,郑燕喃1,郑思婷1,宾建平2,廖禹林2,石敏1,周锐1,*,廖旺军1,*【摘要】背景与目的多项临床研究表明,基线肿瘤负荷与免疫检查点抑制剂(immunecheckpointinhibitor,ICI)的疗效负相关。本研究旨在探讨高肿瘤负荷(hightumorburden,HTB)和低肿瘤负荷(lowtumorburden,LTB)肿瘤对ICI治疗敏感性不同的具体机制。方法为了进行体内实验,我们通过皮下成瘤的方式建立了多种小鼠模型,并利用转录组测序、免疫组化和流式细胞术检测各组皮下瘤的免疫微环境。为了探讨潜在的分子机制,我们使用了细胞共培养、细胞因子抗体芯片、蛋白质印迹、流式细胞术和酶联免疫吸附测定等方法进行体外实验。结果我们发现抗程序性死亡受体-1(programmedcelldeathprotein-1,PD-1)治疗对HTB组的MC38或B16皮下瘤均无效。通过流式细胞术我们发现,与LTB组相比,HTB组的皮下瘤中的CD8+T细胞浸润数量显著减少,而M2型巨噬细胞数量增加。这种变化既不受注射肿瘤细胞的初始数量或肿瘤年龄的影响,也不能通过减瘤手术来逆转。在皮下瘤生长的不同时间点,我们对小鼠进行腹腔注射集落刺激因子1受体(colony-stimulatingfactor1receptor,CSF-1R)抑制剂,发现只有在肿瘤早期阶段给药,才能使长到高肿瘤负荷时的肿瘤对抗PD-1治疗有反应,这是因为早期阶段给药可以让生长中的肿瘤保持“热”的肿瘤微环境。在机制方面,我们发现HTB肿瘤组织中胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP2)的表达水平显著升高。IGFBP2通过激活信号转导子和转录激活因子3(signaltransducerandactivatoroftranscription3,STAT3),促进M2型巨噬细胞中程序性死亡配体1(programmeddeath-ligand1,PD-L1)的表达,而PD-L1+M2型巨噬细胞通过依赖PD-L1的方式抑制了CD8+T细胞的增殖和活化,从而发挥免疫抑制功能。结论本研究表明,ICI治疗在HTB肿瘤中疗效差的原因是HTB肿瘤通过IGFBP2-STAT3-PD-L1通路促进了PD-L1+M2型巨噬细胞的积聚,并对T细胞增殖和激活产生显著的抑制作用。【关键词】CD8+T细胞;IGFBP2;免疫检查点抑制剂;巨噬细胞;PD-L1;STAT3;肿瘤负荷;肿瘤免疫微环境*通讯作者:廖旺军,nfyyliaowj@;近几十年来,癌症免疫治疗,特别是免疫检查周锐,363799445@点抑制剂(immunecheckpointinhibitor,ICI),为癌#温照伟和孙慧颖对本文贡献相同12症治疗开启了新的篇章[1]。与传统的癌症治疗相比,南方医科大学南方医院肿瘤科,广州510515,广东,中国;南方医科大学南方医院心内科,广州510515,广东,中国ICI能够使细胞毒性T细胞克服免疫抑制,并通过阻原文链接:https:///:..·410·癌症2023年第42卷第8期断免疫检查点分子的配体-受体配对,如程序性死亡本研究已获得广东省广州市南方医院伦理审查受体1(programmedcelldeath-1,PD-1)和程序性死委员会的批准。在我们获取临床组织样本之前,每亡配体1(programmeddeathligand-1,PD-L1),激活位患者均签署了知情同意书。本研究的组织样本队细胞毒性T细胞对肿瘤细胞的细胞毒效应[2]。尽管ICI列包括两种类型:(1)根治切除术队列:该队列在各种恶性肿瘤中有良好和持久的治疗反应,但仍包括具有不同T分期的接收根治切除术的结直肠癌有一部分肿瘤,特别是“冷肿瘤”对ICI治疗反应较患者。我们收集了2012年1月至2018年1月期间,51差,这些肿瘤具有T细胞浸润不足和免疫原性低的特例接受根治性肿瘤切除的结肠癌患者的石蜡包埋样征[3]。因此,更好地筛选出对ICI反应较差的患者和本。根据瘤体积的中位数,患者被分为LTB组(n=更好地理解该类患者抵抗ICI治疗的机制,将有助于26;平均体积=)和HTB组(n=25;平均开发有效的免疫治疗策略,以及扩大适合免疫治疗体积=)。(2)结直肠肝转移队列:该队的人群。列包括在广东省广州市南方医科大学南方医院被组目前,基线肿瘤负荷已被证明是多种恶性肿瘤织学上诊断为结直肠肝转移的患者。这些患者的肝中ICI治疗的预测及预后生物标志物。较小的肿瘤转移病灶体积必须达到足够的大小以进行活检。我负荷通常意味着对ICI治疗有更好治疗反应,以及们收集了20例结肠癌患者的肝转移病灶的穿刺活检更长的总体生存期或无进展生存期[4-7]。然而,肿瘤样本。负荷与ICI疗效之间存在负相关关系的具体机制仍我们还分析了来自TheCancerGenomeAtlas不清楚。一些研究表明,高肿瘤负荷(high-baseline(TCGA)数据库(/)tumorburden,HTB)和低肿瘤负荷(low-baseline中结直肠癌(COAD)和黑色素瘤(SKCM)队列tumorburden,LTB)之间存在肿瘤微环境(tumor的HTB和LTB患者在TME中免疫细胞浸润方面的microenvironment,TME)特征的差异,但研究结果差异。我们从Thorsson等[11]的研究中提取了TCGA-尚不明确。例如,在弥漫大B淋巴瘤患者中,HTB与COAD和TCGA-SKCM队列中每个样本的TME中免固体肿瘤组织或循环血液中的Ki-67+T细胞的数量减疫细胞的估计比例。从UCSCXena网站(https://少相关[8];在导管型乳腺癌中却出现相反的现象,/)[12]下载符合条件的TCGA-COAD和有较大肿瘤负荷的肿瘤组织中,细胞毒性T淋巴细胞TCGA-SKCM样本的TNM分期[一种由国际抗癌协会的浸润数量显著增加[9]。同样地,在临床前研究中,()提出的基于肿瘤病变范围的分类方法]信小鼠肾腺癌模型中CD8+T细胞的浸润数量随着肿瘤息。根据TNM分期系统的T分期,患者分别被分为负荷的增加而显著减少;而在CT26肿瘤中,大肿瘤HTB组和LTB组。T0或T1分期的患者被分入LTB组,中CD8+T细胞的浸润数量比小肿瘤的多[10]。因此,而T4分期的患者被分入HTB组。,我们需要进行更多的研究来阐结肠癌细胞系MC38、黑色素瘤细胞系B16和小明这种联系。,我们旨在探索肿瘤微环境特征的生物科技有限公司。用含10%胎牛血清的1640RPMI差异能否导致结肠癌和黑色素瘤中HTB和LTB肿瘤对培养基培养结肠癌细胞系MC38。用含10%胎牛血清ICI治疗敏感性的不同。此外,我们还进一步探索了的DMEM培养基培养黑色素瘤细胞系B16。所有细胞与肿瘤负荷相关的免疫表型形成的具体机制。均孵育在5%、CO和37oC的湿润环境中。所有细胞2系于2015年1月27日通过短串联重复基因分析进行了1材料与方法学鉴定。:..癌症2023年第42卷第8期·411·南方医院动物伦理委员会的批准(申请号:21d腹腔注射抗PD-1抗体(10mg/kg);(4)对于NFYY-2017-0926)。C57BL/6J小鼠购于广东医学IGFBP2中和治疗组,于第7d腹腔注射抗IGFBP2抗体实验动物中心(SCXK2013-0002,广州,广东,中(10mg/kg)到小鼠体内;(5)对于生理盐水+IgG国)。在温度为25oC、湿度为50%--60%的环境中饲治疗组,于第7和第9d给予小鼠口服100μL生理盐养小鼠。光照周期为12h光照和12h黑暗。在本研究水,于第17、19、21d腹腔注射IgG(10mg/kg);中,使用的人道主义终点包括:对临终的动物进行(6)对于生理盐水+抗PD-1治疗组,于第7和第9d给了人道***。基于动物使用协议,我们使用了两予小鼠口服100μL生理盐水,于第17、19、21d腹腔个标准来识别临终动物:(1)出现呼吸困难、进食注射抗PD-1抗体(10mg/kg)。每3d用游标卡尺测困难或饮水困难等病症的小鼠;(2)小鼠体重在4量一次肿瘤体积。实验结束时,小鼠被***,立天内下降≥15%。小鼠在深度麻醉后被***。本研即解剖肿瘤并检测皮下肿瘤的CD3+CD8+T细胞或巨究使用的小鼠总数为156只:抗PD-1治疗小鼠模型噬细胞。(每组5只小鼠)、用于RNA测序的小鼠()、各种肿瘤负荷小鼠模型(每组3只小鼠)、用于腹腔注射的抗PD-1抗体(BE0146,10mg/kg)手术小鼠模型(每组12只小鼠)、PLX3397联合抗和抗IGFBP2抗体(AF797-SP,10mg/kg)购买于PD-1治疗小鼠模型(每组3只小鼠)、IGFBP2中和BioXCell(北京,中国)。用于抑制STAT3的磷治疗(每组3只小鼠)、用于细胞因子抗体芯片检测酸化作用的FLLL32(1226895-15-3,5μmol/L)的小鼠(每组1只小鼠)、用于细胞提取的小鼠(20和HJC0152(S8561,5μmol/L)购买于Selleck只小鼠)。Chemicals(上海,中国)。用于检测肿瘤组织培养为了构建小鼠模型,我们将MC38细胞或B16细上清液中IGFBP2含量的IGFBP2酶联免疫吸附测定胞皮下接种到4周龄的雌性小鼠中。将MC38细胞或(ELISA)试剂盒(F5217-A)购买于JiangsuYutongB16细胞皮下注射到同一只小鼠的左侧(2×106个细(常州,江苏,中国)。用于测试暴露于组织培养胞)和右侧(5×105个细胞)后肢。-FITC/量肿瘤的体积,肿瘤体积的计算公式为:体积=(长PI凋亡检测试剂盒(CA1020)购买于Solarbio(北度×宽度2)/2。为了阐明手术切除肿瘤对肿瘤微环京,中国)。用于检测小鼠LTB和HTBMC38皮下肿境的影响,我们在皮下瘤植入后的第14d切除了左瘤环境中细胞因子含量的小鼠细胞因子抗体芯片C1侧皮下瘤的一部分,以确保两侧肿瘤的体积大小一(AAM-CYT-1000-2)购买于RayBiotech(Atlanta,致。从纵向的皮肤切口沿肿瘤长轴切除部分肿瘤。ia,USA)。本研究中使用的其他试剂和抗体在第14、16、18和21d,使用流式细胞术检测皮下瘤的详细信息详见于附表S1和附表S2。中的CD3+CD8+T细胞。,小鼠被随机分配根据之前描述的方法[13],将福尔马林固定的组(非盲)到不同的治疗组,并根据具体的实验目的织石蜡块切成4mm厚度的切片,并进行免疫组化。腹腔注射不同的药物或抗体:(1)对于抗PD-1或将石蜡切片加热至65oC,持续4h。肿瘤组织切片经过IgG治疗组,于第14、17、20、23d给小鼠腹腔注射脱蜡和酒精梯度水化处理。-1(10mg/kg)或IgG(10mg/kg)抗体;(2)檬酸缓冲液(pH=;ZeyeBiotech,上海,中国)对于PLX3397(d7)联合抗PD-1治疗组,于第7和第中进行微波抗原修复,持续10min。然后,用3%的过9d给小鼠口服PLX3397(40mg/kg),于第21、23、氧化氢(ZeyeBiotech,上海,中国)阻断内源性过25d腹腔注射抗PD-1抗体(10mg/kg);(3)对于氧化物酶活性,持续10min。在室温下与5%牛血清PLX3397(d13)联合抗PD-1治疗组,于第13和第15白蛋白(20μL,Macklin,上海,中国)孵育1h后,d给小鼠口服PLX3397(40mg/kg),于第17、19、切片在4oC与抗小鼠CD8抗体(1:50,66868-1,:..·412·癌症2023年第42卷第8期Proteintech,Rosemont,IL,USA)孵育过夜。,切片与兔抗小鼠CD8抗体(1:200,ab217344,将LTB和HTB皮下瘤切成体积相等的小块。肿Abcam,美国马萨诸塞州剑桥)在37℃孵育1小时。瘤块被放置在4°C的1mLDMEM中,静置24h。上清随后按照DAB底物试剂盒(G1212,Servicebio,武液被收集并离心(1000rpm,5min)。然后,按以汉,湖北,中国)的说明孵育切片。然后,用苏下比例制备培养基:对照培养基(50%完全培养基木精(20μL,aladdin,上海,中国)进行染色,+50%无血清培养基),LTB皮下瘤组织培养上清液用乙醇脱水(70%、80%、90%、95%、100%乙醇,(LTCS,50%完全培养基+50%MC38或B16LTB皮Macklin,上海,中国)并封片。使用Image-ProPlus下瘤组织培养上清液),(ICS,Rockville,Maryland,上清液(HTCS,50%完全培养基+50%MC38或B16USA)计算CD8蛋白的综合光密度值。HTB皮下瘤组织培养上清液)。,腹腔巨噬细胞(mac-Ps)与对照培养为了提取肿瘤浸润淋巴细胞,我们使用胶基、LTCS或HTCS共同培养24h,然后用于流式细胞原酶I(1mg/mL,A004194,SangonBiotech,上术或共培养实验。海,中国)消化皮下瘤。(MLSM1092,MultiSciences,杭州,浙江,中国)纯化的脾脏CD8+T细胞(每孔1×105个细胞/96孔分离细胞。用磷酸盐缓冲盐水(phosphate-buffered板)和上清液刺激的巨噬细胞(×105个细胞saline,PBS)洗涤细胞2次,并用PBS重悬细胞。纯/96孔板)在含10%FBS、重组小鼠白介素-2(rmIL-2,化的肿瘤浸润淋巴细胞将用于流式细胞术。2ng/mL,P00198,Solarbio)和CD3/CD28抗体(每8×104为了提取脾脏CD8+T细胞,我们使用胶原酶I个细胞2μL,ThermoFisher,Wilmington,Massachusetts,(1mg/mL)对脾脏进行消化,并使用淋巴细胞分离USA)的1640RPMI培养基中共培养5d,加或不加抗液(1:1,MultiSciences,杭州,浙江,中国)进行PD-L1抗体(5μg/mL,BE0101,BioX-Cell,北京,中细胞分离。细胞经过2次洗涤后重悬于PBS中。使用国)。然后,CD8+T细胞被洗涤2次并重悬于PBS中。小鼠CD8+T细胞富集试剂盒(8804-6822,Miltenyi,通过流式细胞术分析细胞。BergischGladbach,Rheinisch-BergischerKreis,)处理收集到的淋巴细胞的单细胞悬浮液。为了分析肿瘤浸润CD8+T细胞,预先制备纯化的脾脏CD8+T细胞将用于共培养实验。小鼠淋巴细胞的单细胞悬浮液,并用针对以下为了提取肿瘤浸润巨噬细胞,我们使用胶原酶I表面标记物的抗体混合物染色:CD45(1:100;(1mg/mL)消化皮下肿瘤组织,并使用单核细胞分离AM04505-100,MultiSciences,中国浙江杭州)、培养液(P3970,Solarbio)分离细胞。细胞在含有10%CD3(1:100;69-0032-82,eBioscience,SanFBS的DMEM中,在5%CO、37oC条件下培养3h。去除Diego,California,USA)和CD8a(1:100;2非黏附细胞后,黏附细胞用于继续培养或用于流式56-0081-82,eBiocience)。为了分析M2型巨噬细细胞术。胞,将巨噬细胞的单细胞悬浮液与CD11b(1:100;从4周龄的雌性C57BL/6J小鼠中收集腹腔巨AH011B01-100,MultiSciences)、CD11c(1:100;噬细胞(mac-P)。将小鼠进行***后,消毒腹AM011C05-100,MultiSciences)、CD206(1:100;部,注射3mLPBS到腹腔内。轻轻按摩腹部5min。25-2061-80,MultiSciences)、F4/80(1:100:通过离心(3000rpm,10min)收集腹水细胞,并AM048004-100,MultiSciences)和PD-L1(1:100;在含有10%FBS的DMEM中,5%CO2、37°C条件下AM27407-20,MultiSciences)。为了分析共培养系统培养3h。非黏附细胞被去除,黏附细胞用于继续培的CD8+T细胞,用CD45(1:100;AM04505-100,养。MultiSciences)、CD3(1:100)和CD8a(1:100):..癌症2023年第42卷第8期·413·孵育细胞,随后用固定/破膜试剂盒(GAS003/2,片之间进行背景校正和归一化。在以下选择条件MultiSciences)处理细胞,并用Ki-67(1:100;下,采用倍数变化(表达差异倍数)筛选差异蛋12-5698-80,MultiSciences)孵育。在4oC孵育30min白:(1)倍数变化≤≥;(2)每组的平均后,每个样品(1×106个细胞)洗涤2次并重悬于信号值>150。PBS中。随后通过流式细胞术(BDBioscience,,NewJersey,USA)分析细胞。根据说明书,使用IGFBP2-(RNA-seq)分析(F5217-A,JiangsuYutong)检测皮下瘤中的IGFBP2使用Trizol(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)水平。将皮下瘤裂解后的溶液加入96孔板中,并与提取组织样品中的总RNA。使用Oligo(dT)磁珠试剂盒中的抗体一起孵育。在洗去非粘附抗体后,(Beyotime,上海,中国)从总RNA中分离和纯化加入反应试剂,并通过分光光度法(SPECTRO,mRNA。根据说明书,使用NEBRNA超定向试剂盒Kleve,Germany)在450nm处测量吸光度。(NEB,Massachusetts,USA)。使用BGIseq500平台(BGI,深圳,广使用RIPA裂解缓冲液(Macklin,上海,中国)东,中国)进行测序。使用Bowtie2((Beyotime,上海,com/BenLangmead/bowtie2)将数据与小鼠参考基因中国)提取腹膜巨噬细胞、(https://总蛋白。然后,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰***。/)进行校准。移蛋白的聚偏***乙烯膜(Merckmillipore,Kleve,)与一抗在4oC孵育过夜,荧光团偶联羊抗我们使用R包limma的voom算法转换转录组测兔(FDR007,Fdbioscience,中国)或抗小鼠二抗序的计数数据,并基于voom转换的转录组数据获得(FDM007,Fdbioscience)孵育1h,然后使用奥HTB和LTB肿瘤组织之间的差异表达基因。基于GO德赛红外成像系统(LI-COR;Lincoln,内布拉斯数据库的基因集文件和在线富集工具“KOBAS”加州,美国)进行扫描。以下是用于蛋白印迹的一(./genelist/),使用基因集抗:兔抗信号转换器和转录激活因子3(STAT3)富集分析来估计通路激活水平[14]。简而言之,我们(1:10000,4904T,CellSignalingTechnology,在网页(./genelist/)上的Danvers,MA,USA)),抗磷酸化的STAT3(Y705)相应输入框中输入HTB组的高表达和低表达基因,(1:1000,9145T,CellSignalingTechnology),选择“物种”为“人类”,选择“富集数据库”为以及小鼠抗甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)(1:“GO”下载输出结果。5000,5174,CellSignalingTechnology)。-CYT-1000-2小鼠细胞因子抗体芯片所有统计分析均使用R软件()、(RayBiotech,Norcross,ia,USA)检测来自GraphPadPrism软件(;GraphPad软件,LTB和HTBMC38或B16皮下瘤的细胞因子。简而言圣地亚哥,加利福尼亚州,美国)和社会科学统计之,将样品加入孵育孔中,在4oC下振荡孵育过夜。软件包(SPSS)软件(;IBMSPSS,San室温摇洗膜,加入密封液,室温孵育2h。将1mL检Diego,California,USA)进行。定量数据以平均测溶液C和1mL检测溶液D混合。在每层膜上加入值±标准差表示。对正态分布变量和非正态分布变500μLC/D混合物。将膜缓慢摇晃2min,然后除去量,分别采用t检验和Mann-WhitneyU检验来估计两混合物。从扫描中获得的原始数据使用Raybiotech组间比较的统计学意义。对于两组以上的比较,在软件(RayBiotech,Norcross,ia,USA)在芯适当的情况下使用Kruskal-Wallis(非参数)和单向方:..·414·癌症2023年第42卷第8期差分析(参数)检验。采用Fisher精确检验来比较分seq。在HTB肿瘤中,共发现了108个显著上调的基类数据的差异。认为P<。因和667个显著下调的基因(图2H)。GO富集分析显示,HTB肿瘤中上调的基因主要富集于与肿瘤增2结果殖和转移的相关通路,如细胞外基质调控和血管生成;“免疫荒通路(图2I),包括先天和适应性免疫反应。与GO漠”表型相关富集分析的结果一致,在MC38和B16模型的HTB肿首先,我们比较了TCGA-COAD和TCGA-SKCM瘤中均观察到CD8+T细胞数量的减少(图2J、K)。队列中HTB组和LTB组肿瘤组织的免疫细胞浸润情综上所述,这些结果表明在小鼠皮下瘤模型中HTB况。根据我们在方法部分中提到的策略,将患者分与“免疫荒漠”表型及ICI疗效差相关。为HTB组和LTB组。如图1A、B所示,“免疫荒漠”表型既不是肠癌患者和黑色素瘤患者中,HTB组的肿瘤浸润淋由肿瘤年龄引起的,也不是由肿瘤大小的形态学因巴细胞区域和淋巴细胞特征表达水平明显低于LTB素引起的组,表明HTB肿瘤的TME特征与“免疫荒漠”表型接下来,我们试图明确肿瘤年龄或肿瘤大密切相关。为了进一步验证这些结果,我们收集了小的形态学因素是否参与了HTB肿瘤中“免疫荒51例结肠癌患者的术后组织和20例结肠癌肝转移患漠”表型的形成。为了构建不同的HTB和LTB皮下者的转移瘤穿刺标本进行IHC染色。以肿瘤体积的中瘤小鼠模型,我们将30只小鼠随机分到5组MC38位数为阈值,将51例结肠癌患者分为LTB组26例和组和5组B16组(图3A,补充图S2A、B)。对第1HTB组25例,,HTB组小鼠左侧皮下注射5×105个细胞,生长2周,。IHC染色显示,HTB组记为“单侧,2周,LTB(SS2W-L)”;对第2组的CD8+T细胞数量明显低于LTB组(图1C)。在结小鼠左侧皮下注射2×106个细胞,生长2周,标记肠癌患者肝转移瘤的穿刺活检样本中观察到类似的为“单侧,2周,HTB(SS2W-H)”;对第3组小结果,较大转移瘤中CD8+T细胞的数量低于较小转鼠左侧皮下注射5×105个细胞,生长3周,标记为移瘤的(图1D)。这些结果表明,HTB肿瘤的TME“单侧,3周,HTB(SS3W-H)”;对第4组小具有“免疫荒漠”表型,其特征是瘤内的CD8+T细胞鼠左右两侧同时皮下注射5×105个细胞,分别标浸润数量显著减少。然而,HTB是否通过转化TME来记为“两侧,2周,LTB1(TS2W-L1)”和“两影响ICI的疗效,以及具体的机制仍有待探索。侧,2周,LTB2(TS2W-L2)”;,高基线肿瘤负荷与“免侧皮下注射5×105个细胞,生长2周,右侧同时注疫荒漠”表型和抗PD-1治疗的低疗效相关射5×105个细胞,生长3周,分别标记为“两侧,为了进一步确认肿瘤负荷、免疫表型以及ICI2周,LTB3(TS2W-L3)”和“两侧,3周,HTB2疗效的关系,我们使用2×106或5×105个肿瘤细胞(TS3W-H)”。如图3B、C所示,不管在MC38模(MC38细胞或B16细胞)构建HTB和LTB皮下瘤小鼠型还是在B16模型中,与SS2W-L组相比,SS2W-H和模型,随机将这些小鼠分为anti-PD-1治疗组和免疫球SS3W-H组浸润CD8+T细胞数量显著降低,而SS2W-H蛋白G(IgG)对照组(图2A,补充图S1A、B)。与组和SS3W-H组之间没有显著差异,这表明HTB相临床结果一致,在MC38(图2B-D)和B16(图2E-关免疫抑制TME的形成与初始肿瘤细胞数量和肿瘤G)的荷瘤小鼠中,LTB组的肿瘤生长被抗PD-1治疗生长时间无关。对于接受双侧皮下瘤植入的小鼠,显著抑制,而HTB组的肿瘤对抗PD-1治疗没有任何虽然总肿瘤负荷增加,TS2W-L1和TS2W-L2肿瘤组反应。为了研究HTB削弱ICIs疗效的具体机制,我织中CD8+T细胞的比例与SS2W-L组没有显著差异,们分别取HTB组和LTB组MC38皮下肿瘤进行RNA-表明每个肿瘤组织的TME特征取决于自己的肿瘤负:..癌症2023年第42卷第8期·415·图1HTB与TME中CD8++-B:BoxplotsshowthescoresofimmunesignaturesintheTCGA-COAD(A)andTCGA-SKCM(B)%-75%ofvalues,linesinboxesrepresentmedianvalues,,:IHCstainingshowedtheamountofCD8+Tcellsincoloncancerpostoperativetissues(LTB,n=26;HTB,n=25;scalebar=100μm).D:IHCstainingrevealedthepopulationofCD8+Tcellsintheneedlebiopsy