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继代培养对灵芝胞外酶活力及品质的影响.pdf


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】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。万方数据继代培养对灵芝胞外酶活力及品质的影响罗舒,姚珂,许晓燕周州,宋怡,罗霞,摘要:为探究菌种继代培养对灵芝栽培过程中胞外酶活力和灵芝子实体品质的影响,采用比色法、高效液相色谱法等研究了不同传代次数菌种对灵芝胞外酶活力、子实体干基生物学效率、浸出物、多糖、三萜及甾醇、灵芝酸类成分的影响,并通过相关性分析探讨胞外酶活力和灵芝品质之间的相关性。结果表明,随着菌种继代培养次数的增加,灵芝漆酶、滤纸酶、纤维素酶和淀粉酶酶活力呈下降趋势;相关性分析表明,漆酶、滤纸酶、纤维素酶和淀粉酶酶活与子实体干基生物学效率、浸出物、多糖质量分数及灵芝酸⒘橹ニ酓、灵芝酸⒘橹ハ┧酇和灵芝烯酸柿浓度呈极显著正相关:进一步通径分析发现滤纸酶是影响灵芝干基生物学效率及多糖、灵芝酸柿颗ǘ鹊墓丶饷福宋孛甘怯跋炝橹ハ┧酇质量浓度的关键胞外酶。因此,在实际生产中,应将灵芝菌种继代培养次数控制在阅冢手兄饕0饷妇哂懈呋盍Γ橹ジ苫物学效率高且品质最好。关键词:灵芝:继代培养;胞外酶;相关性;通径分析中图分类号:文章编号:———痡..—...,,瑃,拇↖省中医药科学院,四川啥,,琘琗:甌,,琣..瓹琭基金项目:国家现代农业产业技术体系四川食用菌创新团队项目:四川∈〖犊蒲性核究蒲幸滴穹严钅;四川省“十四五”科技计划资助项目;四川省区域创新合作项目痪嘁┎ㄐ抛髡撸盒硐一毖芯吭保饕4邮率骋┯镁低逞芯俊—:.,收稿日期:——系统研究与转化创新团队项目。万方数据圈■母囝墨响,明确胞外酶活与灵芝产量和品质的相关浅1匾!,琾灵芝为担子菌纲多孑科灵芝属真菌,始载于《神农本草经》,我国在世纪年代首先成功实现了野生灵芝的驯化栽培。在栽培过程中,为满足自身生长发育的需求,灵芝菌丝需将木材等基质中的纤维素、木质素、蛋白质等大分子物质分解为小分子的营养物质,从而进行吸收和转化,这一分解利用和转化过程与菌丝分泌的胞外酶活性紧密相关。近年来,随着灵芝成为我国受众最广、市场接受度最高的食药用菌之一,灵芝栽培在我国迅速发展,年产量已达约万橹ゲ的瓴党僖元K孀帕橹ゲ倒婺;⒄梗檀嘌诹橹ゾ种保藏和扩繁中频繁使用,导致生产用灵芝菌种退化,造成灵芝减产,质量问题多发。因此,深入研究菌种继代培养对灵芝菌丝胞外酶活力变化规律的影目前关于灵芝栽培技术的研究主要集中在高产菌种选育【、栽培基质筛选⒃。作者通过灵芝菌种连续继代培养,研究传代次数对菌丝胞外酶活力的影响,探讨胞外酶活力与子实体产量和品质之间的相关性,为灵芝高产、高质栽培提供理论依据。仪器一土⑹秸羝沽γ鹁鳎荷虾I安医疗器械厂产品:型人工气候箱:浙江托普仪器有限公司产品:一屠涠掣稍机:赛默飞世尔科技公司产品;偷缱臃治天平:梅特勒一托利多仪器虾有限公司产品;吞ㄊ嚼涠忱胄幕旱鹿镜鹿静罚妥贤饪杉止夤舛燃疲河饶峥上海瞧有限公司产品;高效液相色谱仪:美国公司产品。试剂马铃薯葡萄糖琼脂培养基:购自北京奥博鑫生物技术有限责任公司:总蛋白质定量测定试剂盒悸硭沽晾斗:购自南京建成生物工程研究所;一二氮一双一乙基苯并噻唑一换撬二铵盐和木聚糖:购自公司;齐墩果酸对照品和晃匏咸烟嵌哉掌罚汗自中国食品药品检定研究院;灵芝酸哉掌贰⒘芝酸哉掌罚毫橹ニ酕对照品、灵芝烯酸哉品、灵芝烯酸哉掌罚壕鹤猿啥计账忌锟萍股份有限公司;木屑、棉籽壳、玉米芯、麦麸、石灰:购自农资市场;乙***,色谱纯:购自安徽天地高纯溶剂有限公司;硫酸、蒽***等:国产分析纯,购自成都科隆化学品有限公司。供试菌株灵芝菌株由四川≈幸揭┛蒲г壕嘁┎南统研究与开发实验室保藏和提供。供试培养基酆吓嘌鵓培养基⒌鞍纂⒘姿岫饧.⒘蛩崦.⒄⒚拮芽侵量分数%、玉米芯质量分数%、麦麸质量分数ァ⑹抑柿糠质%,水质量分数%~%,C拮芽呛陀衩仔驹な螅尤肽拘己吐麸,混合均匀,并堆料发酵羧胧野柙龋∮的聚丙烯袋,每袋装湿料,娓哐姑鹁菌种继代培养将灵芝菌种佑赑综合培养基斜面上,置于℃,等:继代培养对灵芝胞外酶活力及品质的影响,琯琯瓼—,琣甌,,琣:,记为浚患绦ň諪】接于合培养基斜面上,培养至菌丝长满斜面,记为灰此类推继代接种培养,并依次编号玛、日、?、!。。.耘喙芾将灵芝菌种罞:分别接种于菌袋培养料中,置于℃人工气候箱中培养,湿度%.每代菌种接个菌袋。.堪饷富畈舛粗酶液制备灵芝菌丝长满菌袋后,每代菌种各取个菌袋。取上层基质,冷冻干燥后低温粉碎过目筛,混合均匀后取适量基质粉末,按质量体积比尤胝袅笏蛱崛∫海婧温水浴浸提痬离心锨逡杭为粗酶液。酶活测定采用法测定粗酶液中的蛋白质含量:采用法测定漆酶活力,将每毫克蛋白质每分钟氧化孜顰的酶量定义为一个酶活力单位:采用一二硝基水杨酸比色法测定滤纸酶、纤维素酶、木聚糖酶和淀粉酶活力亢量说鞍字拭糠种哟呋葡萄糖所需的酶量分别定义为一个滤纸酶、纤维素酶和淀粉酶酶活力单位:每分钟催化产生咎撬璧拿噶慷ㄒ逦R桓瞿揪厶敲该富力单位。产量和质量分析出芝管理及子实体采收灵芝菌丝长满菌袋后,每代菌种各取个菌袋,置于℃人工气候箱中出芝培养,湿度%,光照。子实体成熟后采收,置于℃干燥箱中干燥,备用。干基生物学效率测定测定每袋灵芝子实体质量,计算干基生物学效率。式中:形为干基生物学效率,%;C看邮堤甯品质量,籱:为每袋干培养料质量,品质评价观察子实体形态,测定大小:采用热浸法旧测定子实体的浸出物质量分数:采用硫酸蒽***法坎舛ㄗ邮堤宥嗵侵柿糠质翰捎闷攵展丽等的方法测定子实体灵芝酸质量浓度。.。继代培养对菌丝胞外酶活的影响灵芝菌丝通过分泌纤维素酶、木聚糖酶、漆酶等降解酶分解基质中的纤维素、木质素等糖类营养物质,用于满足生长代谢需要。由图芍!O宋酶、漆酶、滤纸酶和淀粉酶的活力随着灵芝菌种继代培养次数的增加而降低。由于这些降解酶酶活力的下降,大分子营养物质的分解利用和转化能力降低,菌丝生长速度减慢,浓密度减弱,对外界环境污染的抵抗力下降。。继代培养对灵芝产量、品质的影响如表,通过干基生物学效率和成分测定可以发现,菌种继代培养次数不影响子实体三总萜及甾醇质量分数。但随着继代培养次数的增加,、原基不开片等现象。多糖和浸出物质量分数降低,灵芝酸⒘橹ニ酓、灵芝酸⒘橹ハ┧酇、灵芝烯酸柿颗ǘ冉档汀?杉檀嘌粤橹ゲ量和品质影响较大。、浸出物质量分数、多糖质量分数等个指标进行喙匦苑治觥=峁绫所示,纤维素酶、漆酶、滤纸酶和淀粉酶的酶活力与灵芝子实体干基生物学效率恐副及浸出物、多糖、灵芝酸⒘橹ニ酓、灵芝酸⒘橹ハ┧。作者在分析胞外酶活与灵芝品质相关性基础上,采用通径分析进一步研究不同胞外酶活的相互作用对灵芝品质的效应大小。簃.%甧:;万方数据菌盖呈肾形、半圆形菌盖呈肾形、半网形菌盖呈半网形菌盖呈半圆形菌盖呈半圆形、扇形周州,等:继代培养对灵芝胞外酶活力及品质的影响荫利,代数图菌种继代培养对菌丝胞外酶活力的影响表菌种继代培养对灵芝形态大小与干基生物学效率的影响宋孛该富盍菌种代数酥矫该富盍儡¥,代数揪厶敲该富盍~.∞加一∞痭一\闰癖苊一∞痭一\熬毯逗谩一∞目/唬躌蜒盔醢螺煺量万方数据;圜菌盖呈扇形出现分枝,菌盖不展开址种Γ遣徽箍纤维素酶酶活力漆酶酶活力滤纸酶酶活力淀粉酶酶活力匏续表表旨檀嘌粤橹ソ鑫铩⒍..±【.。“甧:万方数据台品锛记笱П甑淼期■圜分别以灵芝品质指标——干基生物学效率、浸..琍.,—.径系数均为正值,说明漆酶和滤纸酶对灵芝干基生出物质量分数、多糖质量分数、三萜和衡醇质量分物学效率均表现为正效应,栽培基质中的漆酶和滤数、灵芝酸柿颗ǘ取⒘橹ニ酓质量浓度、灵芝酸纸酶活力高时,将增加灵芝干基生物学效率。决策柿颗ǘ取⒘橹ハ┧酇质量浓度和灵芝烯酸系数是通径分析中的决策指标,用于自变量对因变量浓度为因变量,:、!,。、,。、!。和量的综合作用进行排序,确定主要决策变量和限制纤维素酶、漆酶、滤纸酶、淀粉酶和木聚糖酶酶活力变量薄W员淞亢攵詌,,的决策性大于海得髀为自变量:、弱、:秃耄捎闷ɑ毓榉治龇ń纸酶变量对淖酆献饔檬亲畲蟮模庵钟跋煨в立】,,、骸,、!,、!ⅰ浚ⅰ浚:蛓。的最优多元回归包括直接作用以及与其他胞外酶的协同作用。方程蕹ɑ毓橄凳幌灾淖员淞,分别为由表杉虢鑫镏柿糠质的简单相..,关性中,鲎员淞坑難南喙匦韵凳齲...直径通径作用的系数;分析各问接通径系数可知,,由此可知对的综合作用最大,说明淀粉酶对灵芝浸出物质量分数有最大影响。由表杉攵嗵侵柿糠质比募虻ハ喙.,琘一性中,,其中与..琍.,除的直接通径系数和问接通径系数分别为一、一】,。坪顽薮贾柿糠质外,:对比综合作用表现抑制;滤纸酶对灵芝多性检验表明具有显著差,进一步做通径分析。糖质量分数的综合影响最大。由表杉敫苫镅的简单相灵芝酸类成分是灵芝的主要功效成分,其中灵关性中,自变量滤纸酶,笥谄崦,直径和间芝酸⒘橹ニ酓、灵芝酸⒘橹ハ┧酇、灵芝烯酸接通径作用海绷礁霰淞康闹本逗臀式油浅<牧橹ニ幔S糜诹橹ブ柿考觳饷S杀加孵%%¨%%%蝤%木聚糖酶酶活力干基生物学效率浸镏柿糠质多糖质量分数三萜及甾醇质量分数灵芝酸柿糠质灵芝烯酸柿糠质琘一—.,琘一—甇—.琍.,..琍.,一—嚣舛蚰为垛叮ヵ沁仍%%叭叭%明眇卯%周州,等:继代培养对灵芝胞外酶活力及品质的影响续表注:”∞舵芍#肓橹ニ酇质量浓度,募虻ハ喙匦灾校用分析可知,Mü齒:、墨分别对蚝的作用为鲎员淞坑難,的相关性系数,;直接和间、一,表明淀粉酶与漆酶的交互对提升灵接通径作用的系数凰;决策系数芝酸哂姓喙赜跋欤矸勖竿ü揪厶敲傅募表明6詌,,的综合作用影响较大。对问接通径作接作用对灵芝酸柿颗ǘ扔幸种谱饔谩由表杉肓橹ニ酓募虻ハ喙匦灾校自变量漆酶:笥诼酥矫,直接和问接通径作用均#绷礁霰淞康奈式油ň断凳正值,说明漆酶和淀粉酶对灵芝酸柿颗ǘ染影响。其中漆酶对灵芝的灵芝酸柿颗ǘ鹊淖酆影响最大,表明提高栽培基质中的漆酶活力,能够提升灵芝酸柿颗ǘ取由表可见,与灵芝酸的简单相关性中,鲎员淞坑雔,。的相关性系数本通径作用的系数渲蠿,对苯油ň作用和间接通径作用均为负值,这表明詙。的直接通径作用和间接通径作用呈现负影响,而汉∞邶—一表越鑫镏柿糠质R虮淞康耐ň斗治表以多糖含量为因变量的通径分析以灵芝酸柿颗ǘ任R虮淞康耐ň斗治表以灵芝酸柿颗ǘ任因变量的通径分析———一—..:——!万方数据台品生物技求学报年第卷第凇鲟参考文献:接通径和问接通径作用的系数排序均为毫铮咒对5淖酆嫌跋斐收蛐浴F分侍嵘哪勘曛杏ψ胖匕盐眨晃式油ň蹲饔表表明纤维素酶对灵芝烯酸柿颗ǘ鹊分析可知,Mü齒:、墨分别对比的作用为、综合影响最大。一,表明淀粉酶与漆酶的交互对提升灵芝烯酸由表可见,与灵芝烯酸柿颗ǘ的哂姓喙赜跋欤矸勖竿ü揪厶敲傅募浣幼简单相关性中,鲎员淞坑雔,。的相关性系数、直用对灵芝烯酸柿颗ǘ扔谐室种谱饔茫ǜ河跋较小,同时由决策系数大小为芍#琗。对其中憾詙,的综合作用呈正相关,表明漆酶可能比的综合作用影响较大,表明淀粉酶对提升灵芝的是影响灵芝烯酸闹匾R蛩兀谔岣咭粤橹ハ┧、木质素等来合成、储存子实体发育所需的能量物质阿,胞外酶酶活力的强弱常能反映出菌丝生理生化的活跃程度,影响食药用菌生长发育【M过对灵芝菌种继代培养过程中胞外酶活力、灵芝子实体产量与质量的测定,发现菌种连续继代培养会引起漆酶、滤纸酶、纤维素酶和淀粉酶的酶活力降低,进而减少灵芝子实体产量,引起灵芝品质下降,与斑玉蕈例、真姬菇、草菇、蚕花等食药用菌的研究结果相似。为进一步研究胞外酶酶活力与灵芝子实体品质之问的关系,作者在分析漆酶、滤纸酶等胞外酶酶活力与灵芝干基生物学效率、浸出物、多糖等品质指标的相关性基础上,采用逐步线性回归法进行通径分析。结果发现,纤维素酶、漆酶、滤纸酶和淀粉酶的酶活力与灵芝子实体产量及浸出物、多糖、灵芝酸⒘橹ニ酓、灵芝酸⒘橹ハ┧酇和灵芝烯酸柿颗ǘ瘸始灾喙兀肴萍扮薮贾量分数相关性不显著:通径分析进一步表明,滤纸酶是影响灵芝产量及多糖质量分数、灵芝酸柿浓度的关键胞外酶,纤维素酶是影响灵芝烯酸量浓度的关键胞外酶。,基质中主要胞外酶酶活力降低,进而降低灵芝子实体产量和品质。因此,在实际生产中,为获得高产、优质的灵芝子实体,应将灵芝菌种继代培养次数控制在阅凇M保诼酥矫浮⑾宋孛傅胞外酶与灵芝品质之问的相关性,还可以通过调节栽培温度、改良基质配方等技术手段,提升滤纸酶、纤维素酶等胞外酶酶活力,以达到提产增质的目的。跖危硐啵嗝窝龋橹バ缕分钟钤罅橹サ难∮,,—卯跚吡叫曲周州,等:继代培养对灵芝胞外酶活力及品质的影响表以灵芝烯酸柿颗ǘ任R虮淞康耐ň斗治蠲黛停橹トú盗粗柿靠刂乒娣兜难芯坑胫贫╗食药用菌,,.泼飨龋潞迹扌⒐螅龋橹バ缕分挚刀橹パ∮,,滦惚芙啵挪ǎ龋橹バ缕分帧ㄔ仓号’耙昭Пǎ瞄——.万方数据袁志发,周静芋,郭满才,——通径分析中的决策指标鞅迸┝挚萍即笱аП自然科学版:,王琼,沈梦烨,等.—泶锒粤橹ザ嗵欠⒔,,:—.┮,,—普瘢芙啵肺埃龋嘌闲亢慷粤橹プ邮堤迤分实挠癐訨泄秤镁.:..瓵,,—亩#跎坪欤⒘⒅,,—韩嘉钰,魏巍,余梦瑶,:.,兰进,徐新然,┎模:—.赵玉萍,ⅲ:.安琪,吴雪君,吴冰,:.琈甁,,:.:┛萍汲霭嫔纾张景丽,罗霞,郑林用,:.陈岗,詹永,杨勇,,韩伟,冯娜,:.来李娟,崔田,邓祖磊,等.—,,—贾红岩,王亚涛,张芝华,⑸镅ūǎ:珻.:林辉,詹森然,李佳欢,┮悼蒲В:—.崔驰浩,黄亮,王玉,┮荡笱аП自然科学版:—.—:—.瓹琇瓵琓..琀.—,:—.,,—甧::琄】.

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  • 时间2024-03-27