一种小鼠血小板的提取方法.docx

该【一种小鼠血小板的提取方法 】是由【开心果】上传分享，文档一共【4】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【一种小鼠血小板的提取方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。一种小鼠血小板的提取方法专利名称:一种小鼠血小板的提取方法技术领域:本发明涉及一种小鼠血小板的提取方法,所提取的血小板作为抗原用于免疫豚鼠,豚鼠免疫血清将被用于制备小鼠特发性血小板减少性紫癜动物模型。背景技术:特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制与免疫有密切关系,免疫法所致ITP模型在病理特征和愈合机理方面与人类ITP高度相似,故实验研究主要采用免疫法建立动物模型,'小鼠ITP模型对各种抗ITP药物敏感性较高,因此成功制备小鼠ITP模型是抗ITP药物研究的关键技术之一。但是,此种造模方法的一个显著问题是抗原的纯度不够,即从纯系小鼠全血中分离出血小板的纯度不易控制,如果血小板悬液中混有红细胞,所得的抗血清中会含有大量的抗红细胞抗体,再注射给造模动物会引起动物死亡。发明内容鉴于传统血小板提取方法的不足,本专利提供一种小鼠血小板的提取方法,以解决提取的血小板浓度不够和纯度不佳的问题。具体实验方案小鼠眶静脉取血,置于抗凝离心管中,静置30min后离心,800rpm离心10min,上清液即为富含血小板的血浆。吸出上清液置于干净试管中,3500rpm离心10min,弃去上清液,管底沉淀物为血小板。向试管中滴加50100W质量浓度为1%的草酸铵溶液,以玻璃棒轻轻搅拌,再加入质量浓度为1%草酸铵溶液23ml,静置5min,使红细胞溶解。3500rpm离心10min,弃去上清,加入血小板洗涤液并反复吹打,使成为血小板混悬液,3300rpm离心10min,弃去上清,加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液。血细胞计数板镜下检测血小板的浓度及纯度,并根据结果将质量浓度调至1X1093X109。该方法通过3批次重复实验证明,此方法操作简单,所得血小板浓度和纯度高,用该血小板免疫豚鼠,制备免疫血清,给小鼠投与豚鼠免疫血清,制备小鼠特发性血小板减少性紫癜动物模型,成模率在95%98%之间。具体实施例方式以下结合实施例对本发明的具体实施方式做详细说明。实验实施例一2007年10月10日10月25日,80只SPF级BALB/c小鼠,应用该方法提取血小板,血小板纯度达97°/。,浓度1X1010,使用该血小板制备免疫血清后,制备过敏性紫癜模型,95%成模,并用该模型评价了抗过敏性紫癜中药的疗效及作用机制。实验实施例二2008年4月15日4月30日,100只SPF级BALB/c小鼠,应用该方法提取血小板,血小板纯度达95%,浓度3X101使用该血小板制备免疫血清后,制备过敏性紫癜模型,96%成模,并用该模型评价了抗过敏性紫癜中药的疗效及作用机制。实验实施例三2008年6月12日6月27日,120只SPF级BALB/c小鼠,应用该方法提取血小板,血小板纯度达98%,浓度5X101使用该血小板制备免疫血清后,制备过敏性紫癜模型,98%成模,并用该模型评价了抗过敏性紫癜中药的疗效及作用机制。权利要求1、一种小鼠血小板的提取方法,其特征在于小鼠眶静脉取血,置于抗凝离心管中,静置30min后离心,800rpm离心10min,上清液即为富含血小板的血浆,吸出上清液置于干净试管中,3500rpm离心10min,弃去上清液,管底沉淀物为血小板,向试管中滴加50~100μl质量浓度为1%草酸铵溶液,以玻璃棒轻轻搅拌,再加入质量浓度为1%草酸铵溶液2~3ml,静置5min,使红细胞溶解,3500rpm离心10min,弃去上清,加入血小板洗涤液并反复吹打,使成为血小板混悬液,3300rpm离心10min,弃去上清,加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液,血细胞计数板镜下检测血小板的浓度及纯度,并根据结果将质量浓度调至1×109~3×109。全文摘要一种小鼠血小板的提取方法,小鼠眶静脉取血,置于抗凝离心管中,静置30min后离心,800rpm离心10min,上清液即为富含血小板的血浆。吸出上清液置于干净试管中,3500rpm离心10min,弃去上清液,管底沉淀物为血小板。向试管中滴加50~100μl质量浓度为1%草酸铵溶液,以玻璃棒轻轻搅拌,再加入质量浓度为1%草酸铵溶液2~3ml,静置5min,使红细胞溶解。3500rpm离心10min,弃去上清,加入血小板洗涤液并反复吹打,使成为血小板混悬液,3300rpm离心10min,弃去上清,加入少量血小板洗涤液并反复吹打使之成为混悬液。该血小板将作为抗原免疫豚鼠后,取豚鼠血清给小鼠注射,制备过敏性紫癜模型。此方法操作简单,可以得到高浓度的血小板,并很好地解决血小板纯度不佳的问题。