下载此文档

一种动物组织样的基因组dna提取试剂盒的制作方法.docx


文档分类:论文 | 页数:约6页 举报非法文档有奖
1/6
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/6 下载此文档
文档列表 文档介绍
该【一种动物组织样的基因组dna提取试剂盒的制作方法 】是由【开心果】上传分享,文档一共【6】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【一种动物组织样的基因组dna提取试剂盒的制作方法 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。一种动物组织样的基因组dna提取试剂盒的制作方法专利名称:一种动物组织样的基因组dna提取试剂盒的制作方法技术领域:本发明涉及一种动物组织样的基因组DNA提取试剂盒,尤其是能快速、安全、稳定的提取动物各种组织样中的DNA,所用试剂经济、安全,属于生物技术领域。背景技术:基因组DNA主要指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子,主要存在于细胞核、线粒体、叶绿体内。基因组DNA的提取是许多分子生物学实验的基础,如普通PCR、PCR-RFLP,PCR-SSCP和Southernbot等。传统提取基因组DNA的方法步骤繁琐,花费时间较长,如果提取较多头动物组织样时,会耗费大量的人力物力。提取基因组DNA的方法主要包括酚仿抽提法、浓盐法、阴离子去污剂法等。总的方法和原理为碎化组织样采用眼科剪剪碎法、液氮研磨法或匀浆器研磨法将动物组织样碎化。消化蛋白质采用SDS或苯酚等蛋白变性剂水浴消化蛋白质,分解掉尽可能多的蛋白质。分离析出DNA:先将DNA和RNA这两种核酸中的RNA去除,再将DNA与蛋白质中的蛋白质去除,后用等体积的异丙醇或无水こ醇使DNA析出。洗涤干燥DNA:通过70%こ醇洗涤2次DNA,并于室温干燥。溶解保存DNA:加入一定体积的TE缓冲液或双蒸水(ddH20),4°C保存。提取过程所用试剂较多,操作复杂且耗时较长。当提取大批量样品中的DNA吋,エ作量会很大。发明内容技术问题本发明所要解决的技术问题是提供ー种“傻瓜式”动物组织样中的基因组DNA提取方法,操作简单、所用试剂安全经济、提取效率高、DNA纯度好且能快速、充分溶解,以适应大批量样品基因组DNA的提取。技术方案为解决上述技术问题,本发明的技术解决方案是一种动物组织样的基因组DNA提取试剂盒,包括细胞裂解液(溶液A)、6mol/L的NaCl溶液(溶液B)、三***甲烷(溶液C)、TE缓冲液(溶液D)和蛋白酶K。碎化组织样将动物组织样用剪刀切下20-60mg,,加100μI细胞裂解液,用眼科剪把组织样剪碎,约剪5分钟,然后每管再加入300μI的裂解液(溶液A)。消化蛋白质向每个装组织样的离心管内加入15μI的蛋白酶K,上下颠倒摇匀,放于65°C的振动水浴锅内,水浴2个小吋。分离DNA:将水浴后的样品每管加入200μI的6mol/L的NaCl溶液(溶液B),然后放在冰块上,再加入500μI的三***甲烷(溶液C),上下摇动装有样品的盒子10分钟左右,将样品4°C离心12000转/分,10分钟。析出DNA:取离心管的上清液(约600μI),对号标上记号,加入1000μI无水こ醇(或等体积的异丙醇),小心的摇动离心管直至DNA析出,静置2分钟。将析出DNA的离心管4°C离心,12000转/分,5分钟。洗涤DNA:倒出离心管中溶液,加入1000μI的70%こ醇,轻弹离心管底部,使DNA浸到液体中,以便充分洗涤;4°C离心,12000转/分,2分钟。重复此步骤,洗涤第二次。快速干燥DNA:倒出离心管中溶液,用卫生纸吸走管ロ残液,离心甩下管壁上的こ醇,用10Ul移液器吸走剰余こ醇,倒置5分钟离心管。溶解DNA:加入130-600ul的TE缓冲液(溶液D)或ddH20,放置4°C保存过夜,待用。有益效果试剂盒含有A、B、C、D四种溶液,具有操作简单、提取速度快、成本低廉的特点。本发明先用蛋白酶K将细胞核蛋白中的蛋白质除去,再用高盐溶液对核酸进行提纯,使DNA和RNA分开,最后再用移液器快速干燥DNA,操作简单,不但提取速度快,而且所提取的DNA质量高。本发明通过将DNA提取过程简化,提取试剂组合优化,在保证DNA质量的前提下达到了快速、高效提取的效果组织样只需5分钟剪碎、细胞裂解时间只需2个小吋、DNA干燥只需5分钟,省时省力,特别适用于提取大批量动物组织样本DNA的试验。本发明提取的基因组DNA含量(150-300ng/μI)和纯度高(0D260/280=-),稀释15倍后琼脂糖电泳观察,经琼脂糖检测的条带也很亮,如图I。本发明提取的基因组DNA量大质优,且无蛋白质污染。图I是本发明实施例所提取基因组DNA的电泳图谱。具体实施例方式一种动物组织样的基因组DNA提取试剂盒,包括细胞裂解液(溶液A)、6mol/L的NaCl溶液(溶液B)、三***甲烷(溶液C)、TE缓冲液(溶液D)和蛋白酶K。取猪耳组织60mg,,加100μI细胞裂解液(溶液Α),用眼科剪把组织样剪碎,约剪5分钟,然后再加入300μI的溶液A和15μI的蛋白酶K,上下颠倒摇匀,放于65°C的振动水浴锅内,水浴2个小吋。将水浴后的样品每管加入200μI的溶液B,然后放在冰块上,再加入500μI的溶液C,上下摇动装有样品的盒子10分钟左右,将样品40C离心12000转/分,10分钟。取离心管的上清液(约600μI),对号标上记号,加入1000μI无水こ醇,小心的摇动离心管直至DNA析出,静置2分钟。将析出DNA的离心管4°(离心,12000转/分,5分钟。倒出离心管中溶液后,离心管中再加入1000μI的70%こ醇,轻弹离心管底部,使DNA浸到液体中,以便充分洗涤;4°C离心,12000转/分,2分钟。重复此步骤,洗涤第二次。倒出离心管中溶液,用卫生纸吸走管ロ残液,离心甩下管壁上的こ醇,用10Ul移液器吸走剰余こ醇,倒置5分钟离心管。加入600ul的溶液D,放置4°C保存过夜,待用。以上述方法得到的基因组DNA含量(150-300ng/μI)和纯度高(0D260/280=-),稀释15倍后琼脂糖电泳观察,经琼脂糖检测的条带也很亮,如图I。本发明提取的基因组DNA量大质优,且无蛋白质污染。·,包括溶液A:细胞裂解液;溶液B6mol/L的NaCl溶液;溶液C:三***甲烷;溶液D:TE缓冲液和蛋白酶K。,)碎化组织样将动物组织样用剪刀切下20-60mg,,,再把组织样剪碎,然后再加入300uI的溶液A;.2)消化蛋白质向离心管内加入15的蛋白酶K,上下颠倒摇匀,放于65°C的振动水浴锅内,水浴2个小时;.3)分离DNA:将水浴后的样品加入200uI溶液B,然后放在冰块上,再加入500yl溶液C,上下摇动10分钟,将样品4°C离心12000转/分,10分钟;.4)析出DNA:,加入1000yl无水乙醇或等体积的异丙醇,摇动离心管直至DNA析出,静置2分钟;,12000转/分,5分钟;.5)洗涤DNA:倒出离心管中溶液后,离心管中再加入1000uI的70%(体积比)乙醇,充分洗涤;4°C离心,12000转/分,2分钟;重复此步骤,洗涤第二次;.6)快速干燥DNA:倒出离心管中溶液,用卫生纸吸走管口残液,离心甩下管壁上的乙醇,用10ul移液器吸走剩余乙醇,倒置5分钟离心管;.7)溶解DNA:加入130-600ul的溶液D或ddH20,放置4°C保存过夜,待用。全文摘要本发明涉及一种动物组织样的基因组DNA快速提取试剂盒,属于生物技术领域。试剂盒含有A、B、C、D四种溶液,具有操作简单、提取速度快、成本低廉的特点。本发明通过将DNA提取过程简化,提取试剂组合优化,在保证DNA质量的前提下达到了快速、高效提取的效果组织样只需5分钟剪碎、细胞裂解时间只需2个小时、DNA干燥只需5分钟,省时省力,特别适用于提取大批量动物组织样本DNA的试验。本发明提取的基因组DNA量大质优,可以用600μl溶液溶解DNA,此溶液稀释15倍后,经琼脂糖检测的条带也很亮,且无蛋白质污染。

一种动物组织样的基因组dna提取试剂盒的制作方法 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数6
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人开心果
  • 文件大小18 KB
  • 时间2024-04-17