下载此文档

生物肝素酶法合成途径中三种关键酶的克隆和表达的中期报告.docx


文档分类:论文 | 页数:约2页 举报非法文档有奖
1/2
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/2 下载此文档
文档列表 文档介绍
该【生物肝素酶法合成途径中三种关键酶的克隆和表达的中期报告 】是由【niuwk】上传分享,文档一共【2】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【生物肝素酶法合成途径中三种关键酶的克隆和表达的中期报告 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。生物肝素酶法合成途径中三种关键酶的克隆和表达的中期报告生物肝素酶是一种天然的葡萄糖醛酸聚糖酶,具有广泛的医药和工业应用价值。其合成途径涉及多个关键酶的催化作用,包括肝素酶、C5-肝素化酶和C2-肝素化酶。在这些酶的催化下,肝素链逐步加工修饰,形成结构各异的肝素多糖。因此,这些关键酶的研究对于肝素多糖的高效生产和应用具有重要意义。本文旨在报告生物肝素酶法合成途径中三种关键酶(肝素酶、C5-肝素化酶和C2-肝素化酶)的克隆和表达情况。一、肝素酶的克隆和表达:我们首先克隆了人类肝素酶基因的全长编码序列,并构建了原核表达载体pET22b(+)/heparinase。通过对表达条件的不断优化,我们最终成功表达并纯化了重组肝素酶。纯化后的肝素酶经SDS-PAGE分析,其相对分子质量约为70kDa,与预期大小相符。目前正在进行肝素酶活性测定和底物亲和性检测,以验证其功能活性。二、C5-肝素化酶的克隆和表达:我们从人类脾脏组织中克隆了C5-肝素化酶基因的部分编码区域,(+)/C5-HSase。将该载体转染至HEK293细胞中,通过Westernblot和免疫荧光染色验证了C5-肝素化酶在细胞内的表达。我们还尝试了包括His-tag、GST-tag和MBP-tag等在内的不同融合表达标签,以提高重组C5-肝素化酶的纯度和稳定性。目前正在进行C5-肝素化酶纯化和活性检测等后续工作。三、C2-肝素化酶的克隆和表达:我们从人类肝细胞中克隆了C2-肝素化酶基因的全长编码序列,并将其克隆至高表达载体pPICZαA上。在重组毕赤酵母表达系统中,通过对诱导条件和表达时程的不断优化,我们得到了高效的C2-肝素化酶表达。利用Nickel-NTA亲和层析纯化后的重组C2-肝素化酶经Westernblot验证,其相对分子质量约为65kDa,与预期大小相符。目前正在开展C2-肝素化酶底物亲和性和催化机理的深入研究。综上所述,我们成功克隆并表达了生物肝素酶法合成途径中三种关键酶。通过对这些酶的研究,为高效生产和应用多样化的肝素多糖奠定了基础。

生物肝素酶法合成途径中三种关键酶的克隆和表达的中期报告 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数2
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人niuwk
  • 文件大小10 KB
  • 时间2024-04-18
最近更新