一种nk细胞的制备方法.docx

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使用淋巴细胞分离液离心分离得到PBMC,生理盐水洗涤2次,用50毫升的无血清培养基重悬,取样计数,,加入同样数量的灭活的饲养细胞,添加300000单位的IL-2,500纳克的IL—21。[0047]2)转移培养:接种后的细胞在培养4天后,转入透气的细胞培养袋中继续培养,添加无血清培养基至300毫升,添加15000单位的IL-2,3000纳克的IL-21。[0048]3)二次刺激:扩大培养至第7天时,取样计数,添加相同数量的灭活的饲养细胞进行二次刺激,并按500单位/毫升的浓度添加IL-2,按10纳克/毫升的浓度添加IL-21。[0049]4)扩大培养:每隔2天,根据细胞浓度补充无血清培养基,并按500单位/毫升的浓度添加IL-2,按10纳克/毫升的浓度添加IL-21。[0050]5)收获细胞:在培养到第21天时,取样进行细胞计数和流式细胞仪分析,,增殖539倍;CD3-CD56+%,表明本发明的方法制备NK细胞非常有效率。【权利要求】,包括如下步骤:1)使用慢病毒转染系统将NCR3LG1基因和mIL-15基因同时转染到K562细胞,作为制备NK细胞的饲养细胞;2)将从外周血分离得到的