一株广谱有机磷农药降解基因工程菌株的构建与应用的制作方法.docx

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得的载体命名为pUTTnsTet-oph。2)(含有载体pUTTnsTet-mpd)、辅助菌Ε·coliPRK600、(王堃等,乐果降解菌L3的分离、鉴定及降解性能,中国环境科学)分别在LB培养基中培养至对数后期,5000rpm离心回收菌体,用无菌水洗涤1次,,置于不含抗生素的LB培养基上30V培养,24h后用无菌水洗下菌体,直接涂布于含100μg/mL链霉素、100μg/mL四环素的LB平板上,48h后挑选长出的单菌落即为获得的接合子。3)筛选发生同向重复序列交换剔除外源抗生素基因的整合子将以上获得的接合子在10%(w/v)蔗糖的LB培养基中培养过夜,涂布于蔗糖平板,挑取单菌落,同时点接SLB平板(LB培养基固体平板加10%蔗糖、200mg/kg***对硫磷)和TLB平板(LB培养基固体平板加100mg/kg四环素),挑选能在SLB平板上生长(且能产生水解圈),。4)(pUTTnsTet-oph)