下载此文档

鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因tlr15基因snp分型试剂盒的制作方法.docx


文档分类:论文 | 页数:约5页 举报非法文档有奖
1/5
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/5 下载此文档
文档列表 文档介绍
该【鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因tlr15基因snp分型试剂盒的制作方法 】是由【开心果】上传分享,文档一共【5】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因tlr15基因snp分型试剂盒的制作方法 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因tlr15基因snp分型试剂盒的制作方法专利名称:鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因tlr15基因snp分型试剂盒的制作方法技术领域:本实用新型属于生物技术领域,利用PCR-SSCP技术检测提供一种对鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因Toll样受体15(TLR15)SNP分型的试剂盒。背景技术:Toll样受体(Toll-likereceptor,TLR)家族被认为是目前哺乳动物和脊椎动物唯一将细胞外抗原识别信息向细胞内传递并引发炎症反应的关键跨膜蛋白(Gordon,2002;al.,2009),从源头为疾病机制的研究提供了方向,成为目前研究禽类抗病力的热门基因。ChTLR15是在2006年发现的一个鸡所特有的新的TLR类型,相关研究报道沙门氏菌敏感鸡的ChTLR15的表达水平低于不易感鸡的表达水平,说明ChTLR15是决定鸡是否是对沙门氏菌易感的一个重要因素,而它作为易感性评价的基础就是其SNP特性。单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP),是由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列的多态性,包括转换、颠换、插入或缺失。SNP是疾病易感性、显现性、抵抗力、以及药物反应性等生物性状差异的重要基础,很多疾病与基因突变或基因多态有关。SNP作为第三代遗传标记已得到飞速发展,目前已经多种发展成熟的检测技术,如DNA测序(Sanger测序法和焦磷酸测序法)、单链构象多态性(SSCP)、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交(AS0)、寡聚核苷酸特异的连接、DNA芯片以及Taqman探针等技术手段。经过对现有国内外文献和专利的检索,至今未见有chTLR15基因多态性位点与肠炎沙门氏菌病抗性相关性的报道。实用新型内容本发明的目的是为了给鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因TLR15基因C7^T_SNP的检测提供一种准确性高、快速、价格低廉的基因分型试剂盒。本实用新型的目的是通过以下技术方案实现的,一种鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因TLR15基因SNP分型试剂盒,其特征是所述的试剂盒由盒体,盒体内的衬垫,衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物TLR15P,DNATag酶,扩增缓冲液,dNTP,10%非变性聚丙烯酰***凝胶和甲酰***加样缓冲液组成。其中TLR15P详细信息如下引物混合物TLR15P表示用于TLR15基因PCR扩增的上下游引物混合物,引物信息如下上游引物5,-ACGCTGAGG-3,,下游引物5,-GGGCTTCAACGTCTATGTTG-3,。本试剂盒使用方法UPCR扩增SNP位点所在片段1)PCR扩增反应体系准备[0013]在200μ1的PCR薄壁管中,加入μ模板DNA(约50ng)、2μ1扩增缓冲液(IOXbuffer),、(5uM)、(rTaq),PCR的反应体系为20μ1,充分混勻后短暂离心。2)PCR扩增反应程序设置在^pendorfPCR仪上设置PCR的反应条件为94°C预变性4min,后94°C变性30、611复性308,721延伸308,35个循环,最后721延伸6min,4°C保存备用。程序设置完毕后,将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增。3)反应结束后,取4μ1反应产物在2%琼脂糖胶,1XTBE中电泳,检测反应是否成功。2、SSCP跑胶并鉴定基因型在200μ1的PCR薄壁管中,加入4ul第一步所得PCR产物、8ul甲酰***加样缓冲液,于98°C变性lOmin,然后迅速冰浴IOmin后,在10%非变性聚丙烯酰***凝胶(AcrBis=391),IXTBE条件下电泳,室温下,先用220V电泳20分钟,便于单链DNA初步分离,再用120V电泳12-14h,银染显色。根据电泳图谱,鉴定基因型。本实用新型由TLR15基因PCR扩增的上下游引物混合物P、DNATag酶、扩增缓冲液、dNTP、10%非变性聚丙烯酰***凝胶和甲酰***加样缓冲液组成,利用PCR-SSCP技术检测基因的基因型,具有准确性高、快速、价格低廉的优点。图1为本实用新型的结构示意图;图2TLRl5基因PCR产物SSCP分型图;图中1盒体、2衬垫、3特异性引物混合物TLR15P、4DNATag酶、5扩增缓冲液、6dNTP、710%非变性聚丙烯酰***凝胶、8甲酰***加样缓冲液。具体实施方式结合实施例和附图作进一步说明本实用新型。应理解,这些实施例仅用于说明目的,而不用于限制本发明范围。一种鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因TLR15基因SNP分型试剂盒,由盒体1,盒体内的衬垫2,衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物TLR15P3,DNATag酶4,扩增缓冲液5,dNTP6,10%非变性聚丙烯酰***凝胶7和甲酰***加样缓冲液8组成。运用本试剂盒对52只正常的和41只感染SE的白耳鸡TLR15基因SNP位点进行分型。1、样品采集52只正常的和41只感染SE的白耳鸡的血液,应用传统的苯酚/***仿法提取DNA,并将DNA浓度稀释到50ng/μ1。2、PCR扩增反应及结果PCR扩增及检测结果按照试剂盒使用方法步骤1进行,TLR15基因PCR产物大小为257bp,与预计的结果一致。3、TLRl5基因PCR扩增产物的SSCP鉴定[0031]TLR15基因PCR产物SSCP鉴定按照试剂盒使用方法步骤2进行,检测结果见图2。,其特征是所述的试剂盒由盒体(1),盒体内的衬垫(2),衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物TLR15P(3),DNATag酶(4),扩增缓冲液(5),dNTP(6),10%非变性聚丙烯酰***凝胶(7)和甲酰***加样缓冲液(8)组成。专利摘要本实用新型公开了一种鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因TLR15基因SNP分型试剂盒,属于生物技术领域。鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因TLR15基因SNP分型试剂盒,由盒体,盒体内的衬垫,衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物TLR15P,DNATag酶,扩增缓冲液,dNTP,10%非变性聚丙烯酰***凝胶和甲酰***加样缓冲液组成,利用PCR-SSCP技术检测基因的基因型,具有准确性高、快速、价格低廉的优点。

鸡肠炎沙门氏菌病抗性相关基因tlr15基因snp分型试剂盒的制作方法 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数5
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人开心果
  • 文件大小17 KB
  • 时间2024-04-18