菘蓝愈伤组织诱导..pptx

菘蓝愈伤组织诱导[1]
组长:苏有朋
技术总监:时贯宏执行总监:岳新民
组员: 胡永静热比耶姆
孙慧魏甜甜杨清云
一· 实验目的
熟练掌握菘蓝无菌苗培养的基本方法和操作步骤
掌握愈伤组织诱导的基本方法
实验原理
愈伤组织是由受伤组织形成或外植体诱导而成的一团不断分裂增殖的、无一定方向的,由薄壁细胞组成的细胞块。理论上讲,诱导愈伤组织成败的关键在于诱发愈伤组织的培养条件,其中激素的成分和浓度极为重要。通常情况下,生长素和细胞分裂素对保持愈伤组织的高速生长非常必要,特别是当生长素和细胞分裂素联合使用时,能强烈刺激愈伤组织的形成。[1]
实验材料
菘蓝种子培育的无菌苗
实验药品和试剂
B5培养基,75%酒精,无菌水,%HgCl2,植物激素:NAA、6-BA
实验仪器及用具
光照培养箱、超净工作台、酒精灯、三角瓶、培养皿、枪形镊子、手术剪等
实验方法及步骤
[2]
挑选生长饱满、无病斑的菘蓝种子,75%酒精处理数秒,无菌水冲洗2次,%HgCl2消毒15mim,无菌水冲洗5次,接种于盛有预先配制好的不含任何激素的B5培养基(含2% % 琼脂)的三角瓶中,于光照培养箱中适宜培养13d后,取出三角瓶备用。
[3]
以B5培养基为基本培养基,添加NAA -BA ,。

①操作之前先将无菌室和超净工作台紫外灭菌20-30min,过15m后再进行操作。
②于超净工作台内点燃酒精灯,用酒精棉球擦拭双手,打开生长菘蓝无菌苗的三角瓶,三角瓶的瓶口在酒精灯外焰上烧过灭菌。
③选择长势好颜色深绿的菘蓝无菌苗子叶,用无菌手术剪将其剪成1cm²左右的小块,分别接种到盛有上述配好的培养基的3个三角瓶中,三角瓶口在酒精灯火焰上烧过灭菌,重新封口。
④将三角瓶置于光照培养箱中,调温度25℃,光照12h/d,培养两周后观察愈伤组织生长情况。

菘蓝( Isatis indigotica) 属十字花科菘蓝属二年生草本植,是一种有重要开发前景的药用植物, 为常见的中药材, 是大青叶及板蓝根的主要来源[4]菘蓝中含有多种氨基酸、靛青和靛玉红等多种药用成分, 具有清热、解毒、凉血的功效。愈伤组织的诱导是实现细胞大规模培养和建立高产细胞系的前提和基础, 利用现代生物技术, 以菘蓝叶片
为培养材料, 进行愈伤组织的诱导和增殖, 使其能够进行大规模培养,满足药用需求,还能为靛玉红工业化生产方面提供实验材料。
参考文献
[1]药用植物生物技术实验指导 2014-02
[2]苗永美,简兴菘蓝两种外植体愈伤组织诱导研究生物技术通报[J] 2008,1
[3]张晓旭激素对菘蓝愈伤组织诱导的影响现代中药与研究实践[J] 2012,5
[4]苗永美等两种诱导子对菘蓝愈伤组织诱导与增值的影响种子[J] 2010,4