微生物量碳的测定方法.doc

氯仿薰蒸浸提法测定土壤微生物生物量碳
一、采样与样品预处理
土壤样品的采集方法和要求与测定其它土壤性质时没有本质区别。采集到的新鲜土壤样品立即去除植物残体、根系和可见的土壤动物(如蚯蚓)等,然后迅速过筛(2~3 mm),或放在低温下(2~4℃)保存。如果土壤太湿无法过筛,进行晾干时,必须经常翻动土壤,避免局部风干导致微生物死亡。过筛的土壤样品调节到田间持水量的50%左右,在室温下于密闭装置中预培养1周,密闭容器中要放入两个50mL的烧杯,分别加入水和稀NaOH,以保持其湿度和吸收释放的CO2。预培养后的土壤最好立即分析,若需要放置一段时间,在低温下(2~4℃)最好不要超过10d。
土壤田间持水量采用改进的Shaw(1958)方法测定。在漏斗下端连接一带夹子的橡胶管,漏斗用玻璃纤维堵塞。 g土壤于漏斗中,夹紧橡胶管,加入50 ml水,保持30 min,再打开夹子使多余的水流入量筒,30 min后测定流出的水量,同时测定土壤湿度,计算土壤田间持水量,用烘干土壤质量表示。——林启美老师文件内容
二、方法—氯仿薰蒸浸提法(FE)
1、方法原理
土壤经氯仿薰蒸处理,微生物被杀死,细胞破裂后,细胞内容物释放到土壤中,导致土壤中的可提取的碳大幅度增加。通过测定浸提液中全碳的含量可以计算土壤微生物量碳。
浸提液中碳可用重铬酸钾容量法测定,也可用微量碳分析仪测定。此处介绍比较简单的重铬酸钾容量方法。
2、仪器及设备
培养箱;真空干燥器;真空泵;往复式振荡机(速率200rev/min);冰柜;磷酸浴。
3、试剂
无乙醇氯仿:量取500 mL 氯仿于1000 mL的分液漏斗中,加入50mL硫酸溶液[j(H2SO4)=5%],充分摇匀,弃除上层硫酸溶液,如此进行3次。再加入50 mL去离子水,同上摇匀,弃去上部的水分,如此进行5次。得到纯氯仿存放在棕色瓶中,并加入约20g无水K2CO3,在冰箱的冷藏室中保存备用。(试剂浓硫酸 j(H2SO4)=95~98% ,稀释19倍)
硫酸钾溶液[c(K2SO4)= mol·L-1]: 称取硫酸钾(K2SO4,化学纯),加热溶于去离子水中,稀释至1L。(需加热溶解)
重铬酸钾[c(1/6K2Cr2O7)= mol·L-1]: 称取经130 oC烘干2~3h的重铬酸钾(K2Cr2O7,分析纯),溶于1000mL的去离子水中。
重铬酸钾标准溶液:[c(1/6K2Cr2O7)= mol·L-1]: 称取经130 oC烘干2~3h的重铬酸钾(K2Cr2O7,分析纯),溶于1000mL的去离子水中。
邻啡罗啉指示剂:称取邻啡罗啉指示剂[C12H8N2·H2O,分析纯], FeSO4·7H2O的100mL去离子水中,密闭保存于棕色瓶中。
硫酸亚铁溶液[c(FeSO4)= mol·L-1]:称取硫酸亚铁(FeSO4·7H2O),溶解于600~800mL去离子水中,加浓硫酸(化学纯)20mL,搅拌均匀,定容至1000mL,于棕色瓶中保存。此溶液不稳定,需在用时每天标定其浓度。
硫酸亚铁溶液浓度的标定:
,放入100mL三角瓶中,加水约20mL,