6542对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响及机制分析.docx

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654—2对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响及机制研究
研究生 孙建军
导师 王广田郑州大学第二附属医院河南郑州450014
摘要
背景和目的
原发性肝癌在我国恶性肿瘤中发病率及死亡率己跃居第二位,具有生存期短、发展快、转移早、预后差等特点,其治疗首选仍为手术治疗。手术时有时需阻断肝门,引起肝脏缺血再灌注损伤,甚至导致肝功能衰竭,因此研究肝缺血再灌注损伤及其防治具有重要的临床意义。肝脏的缺血再灌注损伤是氧自由基爆发性形成、白细胞黏附、钙离子超载、炎症介质参与、微循环紊乱和能量耗竭等多因素形成的一个复杂的病理生理过程,揭示其机理、采取适宜的下预措施而减少损伤是肝癌手术尤其是火肝癌手术成功的关键所在。近年来关于缺血再灌注损伤干预方法的研究一直是生命科学研究的热点,干预的措施多种多样。虽然不少学者用氧自由基清除剂和钙离子拮抗剂做肝脏缺血再灌注损伤的动物实验取得良好效果,但经门静脉注射654—2对肝缺血再灌注损伤保护作用及对肝组织P seleczin 蛋白表达的影响少见报道。 造菪碱是我国特产的茄科植物山莨菪中提取的一种生物碱,654—2为其人工合成品,其有解除血管痉挛和改善微循环、对抗再灌注损
。,力、稳定溶酶体和保护线粒体、增加氧代谢等作用。新近研究提示,654—2除有钙离子拈抗作用外,还能抑制内***对膜磷脂的氧化作用,其作用町能与S01)~样, 有减轻自由基损伤的作用。本实验采用654—2干预大鼠在肝脏缺血再灌注时对肝功的保护作用及与p-selectin蛋白表达的关系,来探讨肝癌手术中肝缺血再灌注
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损伤的保护作用,为肝癌手术治疗提供理论依据。对象和方法
健康雄性WiStaF大鼠36只(郑州火学实验动物中心提供),体重200~300 克/只,随机分成三组,每组12只。I组:假手术组(sham operation group, so组),丌腹游离肝门并分出左肝蒂(其内包括肝动脉左支,门静脉左支,左肝管), 门静脉主干内注入3ml/kg体重牛理盐水,45min后关闭腹腔,再过180min打丌腹腔,观察肝脏大体病理特点(形态、色泽等),,取上清液置于一20。C冰箱保存备AST、,同时切除肝左叶并切取 ××%中***尔马林溶液中各HE及 p-sel ectj n蛋白表达检测的染色,余肝组织置于液氮罐中保存各丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测;II组:缺血再灌注组(ischemia reperfusion
.。。oup,I—R组),门静脉主干内注入3ml/kg体重生理盐水(等待5min,使穿刺点肌栓形成并堵塞,防止夹闭肝蒂左支***静脉压力升高导致出m),以无损伤动脉夹夹闭左支,阻断45min后松丌无损伤动脉夹,恢复血流,余同l组:III组:654—2 组(preconditi。ning group,PC组):门静脉主干内注入3ml/kg体重654—2生理盐水()后以无损伤动脉夹夹闭肝蒂左支,阻断45mi n后松开无损伤动脉夹,恢复血流,余同I组。
结果
1 血清AST、ALT、LDH含量测定sO组:血清中ALT(1 ± IU/L)、 AST(± IU/L)、LDH(± IU/L);I R组:血清中ALT(
± IU/L)、AST(± IU/L)、LDH( lu儿)含量
明显高于sO组(P();PC组:血清中ALT(±)、AST(
± IU/L)、LDH(± IU/L)含量明显低于I—R组(P(),与
sO组比较稍高(P()。
2 肝脏组织匀浆MDA含量测定 sO组:肝脏组织匀浆MDA(
nmol/mg);I—R组:肝脏组织匀浆MDA(± nmol/mg),含量明显高于SO组
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(P<);PC组:肝脏组织匀浆M1]A(± nmol/mg),含量明显低丁I R
组(P<),与SO组比较升高(P<)。
。: 病理变化的影响 SO组:肉眼观察肝脏为正常暗红色、有光泽,镜卜-观察为