穿心莲内酯对HL.doc

穿心莲内酯对HL.doc穿心莲内酯对HL
石静梁勇刚
山西医科大学汾阳学院解剖研究室,山西汾阳032200
【摘要】目的:研究穿心莲内酯诱导人HL-60细胞凋亡及相关机制。方法:以人早幼粒白血病细胞株HL-60为模型,作用于HL-、、,实验分为溶媒对照组、、、。采用AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率、流式细胞术结合荧光染色检测穿心莲内酯对细胞色素C(CytC)蛋白表达的影响。结果:穿心莲内酯能促进HL-60细胞凋亡,且呈剂量依赖性。穿心莲内酯作用HL-60细胞24h,CytC蛋白表达增加,(P<)。结论:穿心莲内酯能诱导HL-60细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能与CytC释放的增加、线粒体通路有关。
.jyqkl3个受试浓度。用DMSO溶解穿心莲内酯为50mg/ml贮存液,所需浓度在实验前用RPMI1640培养基稀释生成。实验分为溶媒对照组、、、。
-60细胞24h凋亡率把对数生长期的HL-60细胞浓度调整为1×106个/ml,以1ml/孔接种于6孔板内,加入不同浓度的穿心莲内酯,作用24h后离心收集细胞,PBS液洗涤细胞两次,按照AnnexinV/PI双染法(试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司)步骤操作,1h内上流式细胞仪进行检测,。
、接种、加样品同上。穿心莲内酯作用HL-6024h后收集细胞,800rpm离心5min后,用250μlPBS液清洗2次后重悬细胞于流式管中,加入20μl荧光标记的Cytc(购自Abzoom公司),上流式细胞仪进行检测。
2统计学处理
,用x±SD表示所有实验数据,P&lt;。
3结果
-60细胞24h凋亡定量检测结果显示,和溶媒对照相比,穿心莲内酯各浓度作用于HL-6024h后,各组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及坏死率均随着穿心莲内酯浓度的升高逐渐升高,量效关系明显;与溶媒对照相比,中、高浓度早期凋亡率、晚期凋亡率及坏死率差异有统计学意义(P<)。见表1。
-60细胞24hCytC蛋白表达变化结果表明,与溶媒对照相比,不同浓度的穿心莲内酯作用HL-60细胞24h后,CytC蛋白表达逐渐增加,表明穿心莲内酯作用后CytC从线粒体膜间隙释放到胞浆内的量逐渐增加。见表2。
4讨论
恶性肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一,可发生在任何年龄段,发病率高,预后不良。不断发掘疗效好、毒副作用低的抗癌中草药是研究的新方向。
笔者在前期研究中发现,穿心莲内酯可以抑制人SKOV3、A431、HL-60细胞增殖,并可诱导SKOV3、A431细胞凋亡,其诱导凋亡可能与线粒体膜电位(MMP)下降有关[1-2]。本研究拟在前期研究的基础上,采用AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测穿心