肺炎衣原体感染对c57bl6j小鼠动脉粥样硬化形成影响的研究.docx

肺炎衣原体感染对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化形成影响的研究 中文摘要
为泡沫细胞等,从而导致动脉粥样硬化形成和发展。临床试验发现在冠心病的标准治疗中加用抗肺炎衣原体有效的抗生素(Roxitheomycin、azithromycin) 可能有益,但大规模前瞻性研究WIZARD的结果认为有肺炎衣原体感染证据
的稳定性心肌梗死病人服用Azithromycin三个月冠心病事件无明显减少。研究发现肺炎衣原体感染可加速鼠、兔动物模型的动脉粥样硬化斑块形成。这些实验都没能回答肺炎衣原体感染能否独立地引起动脉粥样硬化发生,仅证明了其可加速AS形成或与高胆固醇饮食协同引起AS发生。
虽然国外对肺炎衣原体感染与AS的关系进行了大量的研究,但仍未确定其因果关系,而且国内的有关研究刚刚起步仅有少量文献报道。CP感染与AS 的关系尚存在许多问题需要进一步研究,肺炎衣原体是引起AS的元凶之一, 还是因为已发生AS的血管壁更易为CP提供栖息地?CP感染究竟是AS的独立危险因素,或仅是一种毫无相关的现象?如果CP感染参与AS或冠心病发生、发展,其确切机制如何?这些问题均需进一步探讨。
全文包括四部分:
第一部分:建立CP感染及高脂饮食C57BL/6J小鼠AS模型,观察反复cP 感染小鼠的生长情况、小鼠抗cP抗体滴度变化和AS斑块的形成情况,探讨 CP感染对血脂和AS形成的影响。
第二部分:检测血浆NO、ET一1及NOS活力,用免疫组织化学法检测 eNOS、iNOS、ET-I在血管中的表达,逆转录PCR分析eNOS、iNOS mRNA 的表达,探讨cP感染对血管内皮功能的影响和NO通路及内皮素在动脉粥样硬化形成中的作用。
第三部分:检测血浆MDA水平,通过荧光探针定位观察超氧阴离子的产生并采用化学发光法体外检测血管环超氧阴离子的产生,应用免疫组织化学法检测ONOO’的标志物硝基酪氨酸,探讨cP感染对氧化应激的影响及氧化应激在AS中的作用。
第四部分:留取冠心病患者和非冠心病患者血浆,检测抗肺炎衣原体抗体
,分析cP感染、炎症和冠一it,病之间的关系。
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研究目的
。

响及血管内皮功能和氧化应激在动脉粥样硬化形成中的作用。 。
材料与方法
,层流架中分笼颗粒饲料喂养,按随机化原则将48只C57BL/6J小鼠分为4组,每组12只,分组情况如下:
I 感染一高脂组:接种CP、高脂饲料喂养
II 高脂组: 接种PBS缓冲液、高脂饲料喂养ⅡI感染组: 接种CP、常规饲料喂养Ⅳ对照组: 接种PBS缓冲液、常规饲料喂养
。任何一支冠状动脉腔径狭窄>50%者定义为冠状动脉疾病
(coronary artery disease,CAD)。
,自小鼠眼眶静脉丛取血, 血清离心后分装一80℃保存。摘除心脏及主动脉至髂动脉分叉处并作以下处理:+5mm处离断升主动脉,OCT包埋液氮保存;%中性甲醛固定,石蜡包埋, 连续切片,作常规苏木精一伊红(HE)染色和免疫组织化学项目检测;、胸主动脉保存于Krebs—Hepes氏液中;℃冰箱保存。
-2细胞内,CP包涵体生长成熟后收集、离,心、纯化。
,主动脉冰冻切片***固定,室温凉干后滴加FITC标记的肺炎衣原体主要外膜蛋白特异性单克隆抗体,荧光显微镜下观察,苹果绿样亮点为阳性。
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肺炎农原体感染对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化形成影响的研究 中文摘要
,由图象分析系统作图象分析。比较各组小鼠平均每张切片As损害面积和斑块面积占总血管壁面积的百分比。
***还原酶法测定血清NO浓度。
—l浓度。
。
、iNOS、
eNOS、iNOS、