HCMV先天性中枢神经系统潜伏感染老年BALB_c小鼠模型的建立.pdf

安徽医科大学
硕士学位论文
HCMV先天性中枢神经系统潜伏感染老年BALB/c小鼠模型的建立
姓名:吴建军
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:王明丽;史百芬
20050501
缩略词表英文缩写英文全称中文全称碱基对互补绥熙癍变效应改良培养液脱氧核糖核苷三磷酸火童绥麓瘸毒人胚成纤维细胞信使磷酸缓冲豁溶液聚合酶链反应空斑形成单位珏猙蜜徽医科大学颤辉煳嚣下’
孙‰。日期:知帅。学位论文使用授权声明≥学位论文独创性声明位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅,有权将学本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版,有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索,有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名日期导师签名
先天性中枢神经系统潜伏感染/老年小鼠模型的建立硕士研究生姓名吴建军导师王明丽教授安徽医科大学病原生物学教研室合肥中文摘要目的:本研究以接种至芰/菩坌∈蟾骨缓螅慌洌邮缶细窦嗖庖荒旰螅⒘薍天性中枢神经系统潜伏感染老年小鼠模型,为探讨先天性中枢神经系统潜伏感染导致的脑损伤机制,构建重要的实验平台。方法:将分别接种至芰銼级/菩坌∈蟾骨缓螅创啤⑿:涑对,所生小鼠随机取只为椋茄荒旰笏婊殖葾阶椋渲蠥槲体内激活组,腹腔注射环磷酰胺妨柞0芳亮/,每次,共;对照组:甇,接种至芰銼级/菩坌∈蟾骨缓螅按雌、雄配成裕∈笏婊晃狟组,饲养一年后随机均分成、组,其中组为体内激活对照组,腹腔注射环磷酰胺,注射剂量及次数等同实验组,在最后一次注射环磷酰胺后的第齑λ佬∈螅陨细髯樾∈缶谄帘蜗统中饲养。实验期间密切观察小鼠一般行为特征和小鼠体重变化,取血清进行了特异性固宓募觳狻4λ雷哟∈笕∧宰橹辛巳缦率笛椋、小鼠脑组织匀浆的病毒分离;和检测子代小鼠脑组织中基因及其转录产物:⒚庖咦榛觳饽宰橹衟鞍椎谋泶铮、小鼠脑神经细胞与细胞共培养体外激活实验;旧ü鄄煨∈竽宰橹±肀浠⑼干涞缇迪鹿鄄煨∈竽宰橹某⒔峁辜安《究帕!2⒁悦庖叩缇等范ㄊ欠裎。结果:⒉《靖腥咀樽哟∈筇逯亟隙哉兆樘逯孛飨约跚发育迟缓;⒉《狙Ъ觳饨峁禾迥诩せ钋埃《痉掷胛R跣裕耗宰橹心懿獬及湎嘤Φ淖B疾镂R跣裕幻庖咦榛觳饽宰橹形安徽医科大学硕士学位论文痬、
蛋白的表达;透射电镜下观察小鼠脑组织中未见病毒颗粒。体内激活后,病毒分离为阳性:脑组织中能测出及湎嘤Φ淖B疾镂Q性,免疫组化检测脑组织神经元细胞浆中有蛋白的表达;透射电镜观察可见小鼠大脑皮质神经元中有疱疹样病毒颗粒,免疫电镜确定为;⒆哟∈脑神经细胞与细胞共培养体外激活后,共培养系统病毒分离阳性;免疫荧光检测共培养细胞内有蛋白的表达;透射电镜可见共培养细胞内大量疱疹样病毒颗粒。实验对照组以上结果均为阴性;⒉±硌Ъ觳饨峁篐旧ǚ⑾指腥咀小鼠脑组织大脑皮质及海马区出现明显的病理变化,神经元肿胀变圆,锥体细胞减少,海马区细胞水肿,形态变圆,胞质疏松,突起变少,细胞层数减少;电镜观察细胞内部分亚细胞结构有损伤,同时发现在一些神经元核中出现核内双股螺旋细丝结构。结论:⒈臼笛槭窃诒究翁庾榻⒌腍忍煨灾惺嗌窬低感染胎鼠模型和潜伏感染老年鼠模型的基础上,成功建立了先天性中枢神经系统潜伏感染老年小鼠模型,为研究先天性中枢神经系统潜伏感染机制提供了更有力的技术平台;忍煨郧狈腥灸芤鹬惺嗌窬统病变较亲代小鼠更为严重,在先天性潜伏感染小鼠大脑皮层神经元的细胞核中,我们发现核内双股螺旋细丝。这种病理改变的出现可能为潜伏感染导致中枢神经系统失调提供新的思路。关键词:人巨细胞病毒;先天性感染;老年小鼠模型;中枢神经系统:潜伏感染。安徽医科人学硕:Q宦畚
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先天性中枢神经系统潜伏感染/老年小鼠模型的建立把㈣。王明丽等㈣试用感染新生乳鼠脑组织制备的原代细胞培养物,观察巨细胞病毒,属火逭畈《狙强疲且恢炙ü上咝《尽T谧匀唤缙毡榇嬖冢揖哂兄质籼匾煨訹”,包括人、鼠、豚鼠巨细胞病毒等。人巨细胞病毒琀在人群中感染非常普遍,发达国家及发展中国家的成人感染率分别为%、%【】。现在证实先天性感染中是最常见的病原体之一,先天性感染又称宫内感染:指由感染母亲所生育的子女于生后天内证实有感染T谛