植物原生质体培养.ppt

植物原生质体培养
(补充)
The cultivation of plant protoplast
(Complementarity)
李宏富
一、两个概念
再生植株
工程植株
二、原生质体分离
1 材料来源
植物原生质体最方便的来源是叶片,因为叶片中可以分离出大量的比较均一的细胞,而又不致使植物遭到致命的破坏。
由于叶肉细胞排列疏松,酶的作用很容易达到细胞壁。
植株的年龄和生长条件是十分重要的。
来源:
①无菌苗
②温室培养的苗
培养条件:
低光照强度(1000lx)
短日照
温度为20~25℃
相对湿度为60%~80%
以及充足的氮肥供应。
2 前处理
要保证酶解能充分的进行,必须促使酶溶液渗入到叶片细胞间隙中。为此,要做到:
撕去叶片的下表皮,以无表皮的一面向下,使叶片漂浮在酶液中。
或把叶片切成小块,结合真空处理效果更好。
或用金刚砂摩擦叶的下表皮。
3 提取方法
①机械分离法(Machanical isolation)
②酶法分离(Enzymatic isolation)
早在1892年,克莱若克(Klercker)就已采用机械法分离原生质体。
方法:细胞放入高渗糖溶液中,质壁分离,剪碎组织,在这个过程中,有些质壁分离的细胞只被切去了细胞壁,从而释放出完整的原生质体。
缺点:产量低;方法繁琐费力;局限性大。分生组织和其他液泡化程度不高的细胞中分离原生质体时不能用此法。
①机械法
②酶解法
1960年Norkinghan大学的植物生理学家Cooking用酶法降解细胞壁,获番茄根尖原生质体,开创了大量获得原生质体的的方法。
20世纪九十年代以来,国内外原生质体培养取得了突飞猛进的发展。 1971年,Takebe等人在烟草上首次由原生质体培养获得植株。至今已获得酶法制备植物原生质体操作方法。